| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| ·丝状真菌转化系统 | 第17-19页 |
| ·丝状真菌转化方法 | 第17-18页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统的选择标记 | 第18-19页 |
| ·丝状真菌转化载体 | 第19页 |
| ·农杆菌介导的丝状真菌转化研究进展 | 第19-25页 |
| ·农杆菌介导转化(AMT)技术概述 | 第20页 |
| ·农杆菌的Ti质粒 | 第20-21页 |
| ·Ti质粒的转化机理 | 第21-22页 |
| ·T-DNA插入位点的分离及应用 | 第22-24页 |
| ·T-DNA整合到真菌基因组的特点 | 第24-25页 |
| ·农杆菌介导转化技术应用于真菌功能基因组学的优点 | 第25页 |
| ·绿色荧光蛋白及其应用 | 第25-28页 |
| ·绿色荧光蛋白结构及其性质 | 第26页 |
| ·绿色荧光蛋白的发光机制 | 第26-27页 |
| ·绿色荧光蛋白作为遗传标志和报告基因的特点 | 第27-28页 |
| ·绿色荧光蛋白在真菌分子生物学研究中的应用 | 第28页 |
| ·本文主要研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 农杆菌介导的瑞氏木霉转化及插入突变分析 | 第30-46页 |
| ·材料与方法 | 第30-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-31页 |
| ·培养基和培养条件 | 第31-32页 |
| ·菌种保藏技术 | 第32页 |
| ·主要分子实验试剂 | 第32页 |
| ·重组DNA技术 | 第32页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第32-34页 |
| ·pBI-hph载体的构建 | 第34页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| ·瑞氏木霉原生质体的制备 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导转化丝状真菌瑞氏木霉 | 第36-37页 |
| ·瑞氏木霉染色体提取 | 第37-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-43页 |
| ·pBI-hph载体的构建结果 | 第39-40页 |
| ·双元载体pBI-hph转化农杆菌AGL1 | 第40页 |
| ·农杆菌介导瑞氏木霉转化 | 第40-41页 |
| ·瑞氏木霉AMT转化子的PCR及杂交验证 | 第41-42页 |
| ·T-DNA插入位点侧翼序列的TAIL-PCR克隆 | 第42-43页 |
| ·插入位点的序列特征分析 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-46页 |
| 第三章 绿色荧光蛋白基因表达盒的瑞氏木霉转化及其表达 | 第46-56页 |
| ·材料与方法 | 第46-51页 |
| ·菌株及质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第46-47页 |
| ·重组DNA技术 | 第47页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第47页 |
| ·绿色荧光蛋白表达盒片段的获取 | 第47页 |
| ·瑞氏木霉染色体提取 | 第47页 |
| ·T.reesei的转化及筛选 | 第47-48页 |
| ·转化子的RT-PCR验证 | 第48-49页 |
| ·转化子蛋白的SDS-PAGE检测 | 第49-51页 |
| ·绿色荧光的观察 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-55页 |
| ·绿色荧光蛋白表达盒的制备 | 第51页 |
| ·T.reesei的转化及筛选 | 第51-52页 |
| ·转化子的分子验证 | 第52-53页 |
| ·转化子胞内蛋白的检测 | 第53-54页 |
| ·转化子的荧光检测 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第四章 绿色荧光蛋白和尿嘧啶缺陷型双标记的农杆菌介导瑞氏木霉转化研究 | 第56-65页 |
| ·材料与方法 | 第56-59页 |
| ·菌株及质粒 | 第56-57页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第57页 |
| ·重组DNA技术 | 第57页 |
| ·引物设计PCR扩增条件 | 第57页 |
| ·双元载体的构建 | 第57-58页 |
| ·农杆菌感受态的制备与转化 | 第58页 |
| ·农杆菌介导转化丝状真菌瑞氏木霉 | 第58-59页 |
| ·瑞氏木霉染色体提取 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·pCMBIA-P载体的构建结果 | 第59页 |
| ·双元载体pCMBIA-P转化农杆菌EHA105 | 第59页 |
| ·含pCMBIA-P双元载体的农杆菌EHA105介导的瑞氏木霉转化 | 第59-60页 |
| ·pCMBIA-OEP载体的构建结果 | 第60-62页 |
| ·双元载体pCMBIAOEP转化农杆菌EHA105 | 第62页 |
| ·含pCMBIA-OEP双元载体的农杆菌EHA105介导瑞氏木霉转化 | 第62-63页 |
| ·瑞氏木霉AMT转化子的验证 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发(待)表的学术论文目录 | 第71页 |
