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农杆菌介导的NPK1基因转化辣椒的研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 文献综述第11-30页
   ·辣椒基因工程研究进展第11-17页
     ·辣椒的离体再生第11-13页
     ·辣椒遗传转化研究进展第13-15页
       ·抗病毒病第13-14页
       ·抗真菌病第14页
       ·抗细菌病第14-15页
       ·抗除草剂第15页
       ·抗虫基因工程第15页
     ·辣椒基因工程中存在的主要问题第15-17页
       ·辣椒植株再生第16页
       ·遗传转化率低第16-17页
       ·转化方法单一第17页
   ·植物抗病基因工程第17-22页
     ·基因对基因假说第17-18页
     ·系统性抗性第18-22页
       ·系统获得性抗性Systemic Acquired Resistance, SAR)第18-19页
       ·诱导性系统抗性(Inducing System Resistance, ISR)第19-20页
       ·植物抗病信号传导途径及其相互作用第20-22页
   ·植物抗逆基因工程研究第22-29页
     ·渗透保护物质(Osmoprotectant) 生物合成的关键酶基因第23-24页
     ·脯氨酸生物合成的相关基因第24页
     ·糖类物质生物合成的相关基因第24-25页
     ·多元醇生物合成相关基因第25页
     ·多胺(Polyamine)第25-26页
     ·胚胎后期发生富集蛋白基因第26页
     ·编码转录因子的调节基因第26页
     ·抗氧化和毒性降解酶相关基因第26-27页
     ·MAPK 研究进展第27-29页
   ·研究的目的及意义第29-30页
第二章 材料与方法第30-37页
   ·材料第30-31页
     ·植物材料第30页
     ·菌株与质粒第30页
     ·主要试剂第30页
     ·培养基与溶液第30-31页
   ·方法第31-37页
     ·辣椒再生体系的建立第31页
       ·无菌苗的制备第31页
       ·不定芽的诱导和分化第31页
       ·不定芽的伸长第31页
       ·生根与移栽第31页
     ·烟草NPK1 基因的克隆第31-32页
       ·烟草DNA 的提取第31-32页
       ·聚合酶链式反应第32页
       ·DNA 序列分析第32页
     ·载体构建第32-34页
       ·玻璃粉法回收DNA 片段第33页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第33页
       ·质粒DNA 的提取第33-34页
       ·冻融法将中间载体导入农杆菌第34页
     ·NPK1 基因导入辣椒第34-37页
       ·外植体Km 抗性测定第34页
       ·农杆菌转染第34-35页
       ·转化植株的再生第35页
       ·植株的PCR 和PT-PCR 的检测第35-37页
第三章 结果与分析第37-43页
   ·辣椒再生体系的建立第37-39页
     ·不定芽的诱导及分化第37-38页
       ·辣椒不同基因型对不定芽诱导分化的影响第37页
       ·不同激素及配比对辣椒不定芽诱导与分化的影响第37-38页
       ·不同外植体对不定芽诱导与分化的影响第38页
     ·不定芽的伸长第38-39页
     ·生根及移栽成苗第39页
   ·NPK1 基因的克隆及表达载体的构建第39-40页
   ·NPK1 基因转化辣椒第40-43页
     ·外植体Km 抗性测定第40页
     ·农杆菌的转染第40页
     ·预培养与侵染时间第40-41页
     ·转基因植株的PCR 和PT-PCR 的检测第41-43页
第四章 讨论第43-46页
   ·辣椒再生体系的建立第43-44页
     ·激素和有机成分的使用第43页
     ·基因型、外植体类型及苗龄的影响第43-44页
     ·AgNO_3 的影响第44页
   ·NPK1 基因的克隆及表达载体的构建第44页
     ·烟草NPK1 基因第44页
   ·NPK1 基因转化辣椒第44-45页
     ·外植体Km 抗性测定第44页
     ·辣椒转NPK1 基因植株的获得第44-45页
   ·存在的问题及下一步工作第45-46页
第五章 结论第46-47页
参考文献第47-53页
附录1第53-54页
附录2第54-55页
致谢第55-57页
作者简介第57页

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