| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-34页 |
| 综述一 糖蛋白组学研究进展 | 第12-28页 |
| 1 糖蛋白概述 | 第12-15页 |
| ·定义及主要类型 | 第12-14页 |
| ·糖基化发生的特点及其对分析技术的影响 | 第14页 |
| ·蛋白质糖基化研究的内容和策略 | 第14-15页 |
| 2 糖蛋白质组研究技术 | 第15-25页 |
| ·凝胶上糖蛋白研究技术 | 第15-16页 |
| ·糖蛋白/糖肽的富集 | 第16-20页 |
| ·层析法 | 第16-19页 |
| ·凝集素亲合技术 | 第16-17页 |
| ·硼酸共价亲和色谱 | 第17-18页 |
| ·亲水相互作用色谱法(HILIC) | 第18页 |
| ·分子筛法富集糖肽 | 第18-19页 |
| ·抗体亲和层析 | 第19页 |
| ·化学修饰法 | 第19-20页 |
| ·肼化学富集法 | 第19-20页 |
| ·β-消除米氏加成反应 | 第20页 |
| ·糖蛋白/糖基化位点的鉴定 | 第20-24页 |
| ·生物质谱技术 | 第20-21页 |
| ·利用糖蛋白中的非糖基化肽鉴定糖蛋白 | 第21页 |
| ·利用糖蛋白中的糖基化多肽鉴定糖蛋白/糖基化位点 | 第21-24页 |
| ·PNGase F酶法 | 第22页 |
| ·Endo H酶法 | 第22-23页 |
| ·β-消除-米氏加成反应 | 第23-24页 |
| ·三氟甲基磺酸法 | 第24页 |
| ·糖链结构的鉴定及含糖量的测定 | 第24-25页 |
| ·糖基化蛋白质的功能研究 | 第25页 |
| 3 糖蛋白质组在人及其他生物蛋白表达谱研究中的应用 | 第25-27页 |
| ·糖蛋白质组在血清/血浆蛋白质组中的应用 | 第26页 |
| ·糖蛋白质组在尿蛋白质组中的应用 | 第26页 |
| ·糖蛋白质组在膜蛋白研究中的应用 | 第26-27页 |
| ·糖蛋白质组在疾病蛋白质组学中的应用 | 第27页 |
| ·蛋白质人工糖基化改性的研究 | 第27页 |
| 4 糖蛋白质组学展望 | 第27-28页 |
| 综述二 磁性微粒及其应用 | 第28-33页 |
| 1 磁性微粒的结构和特征 | 第28-30页 |
| ·磁性微粒的结构 | 第28-29页 |
| ·磁性微粒的主要特性 | 第29-30页 |
| 2 磁性微粒在生物分离中的应用 | 第30-33页 |
| ·核酸分离 | 第30-31页 |
| ·蛋白质分离纯化 | 第31-32页 |
| ·细胞分离 | 第32-33页 |
| 本论文研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 肼功能化磁性微粒分离富集糖肽方法的研究 | 第34-45页 |
| 1 设计思想 | 第34-35页 |
| 2 实验 | 第35-38页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·肼功能化磁粒的制备 | 第35-36页 |
| ·肼功能化磁粒中肼基团含量的测定 | 第36页 |
| ·肼磁粒分离富集糖蛋白 | 第36-37页 |
| ·提取效率的测定 | 第37页 |
| ·糖肽的富集 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE凝胶检测提取特异性 | 第38页 |
| ·MALDI-TOF-MS质谱检测 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-43页 |
| ·肼磁粒中肼含量 | 第38-39页 |
| ·提取条件的优化 | 第39-41页 |
| ·磁粒用量的优化 | 第39-40页 |
| ·提取温度的优化 | 第40-41页 |
| ·提取特异性的验证 | 第41-43页 |
| ·肼磁粒提取单蛋白 | 第41页 |
| ·肼磁粒提取标准蛋白混合物中的糖蛋白 | 第41页 |
| ·竞争性试验 | 第41-43页 |
| ·质谱鉴定提取多肽 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 第三章 基于GNA功能化磁性微粒分离富集糖蛋白方法的建立 | 第45-55页 |
| 1 设计思路 | 第45-46页 |
| 2 试验 | 第46-48页 |
| ·主要试剂与材料 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·各缓冲液配方 | 第46-47页 |
| ·GNA的固定 | 第47页 |
| ·GNA功能化磁粒的封闭 | 第47页 |
| ·GNA固定化效率及固定量的计算 | 第47页 |
| ·GNA功能化磁性微粒分离富集标准蛋白混合物中的糖蛋白 | 第47-48页 |
| ·GNA提取健康人血清中的高甘露糖型糖蛋白 | 第48页 |
| ·GNA功能化磁粒提取人肝癌细胞系总蛋白中的高甘露糖型糖蛋白 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE检测提取结果 | 第48页 |
| 3 试验结果 | 第48-52页 |
| ·GNA固定化条件的优化 | 第48-50页 |
| ·固定pH | 第48-49页 |
| ·固定化时间 | 第49-50页 |
| ·GNA功能化磁粒富集标准蛋白混合物中的糖蛋白结果 | 第50页 |
| ·富集血清中高甘露糖型糖蛋白结果 | 第50-51页 |
| ·富集人肝癌细胞系细胞总蛋白中高甘露糖型糖蛋白结果 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| ·GNA与环氧化磁粒质量比 | 第52-53页 |
| ·GNA固定化条件 | 第53页 |
| ·环氧化磁性微粒封闭剂的选择 | 第53页 |
| ·保存缓冲液 | 第53-54页 |
| ·洗脱缓冲液的选择 | 第54页 |
| ·磁性微粒载体的优缺点 | 第54页 |
| ·凝集素富集糖蛋白的优缺点 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55页 |
| 全文小结 | 第55-57页 |
| 攻读硕士期间的研究成果及发表的论文 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
