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利用酵母双杂交系统筛选与番茄RIN互作蛋白的初步研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-11页
1.前言第11-20页
   ·果实成熟代谢途径的研究进展第12-14页
     ·乙烯合成途径第12-13页
     ·乙烯信号传导系统第13页
     ·转录因子调控第13-14页
   ·RIN基因第14-17页
     ·RIN基因的发现及克隆第14-15页
     ·MADS-box基因家族概念及结构特征第15页
     ·MADS-box基因家族的分类及功能第15-16页
     ·MADS-box基因互作机理第16-17页
     ·番茄中MADS-box基因的研究进展第17页
   ·酵母双杂交系统第17-18页
   ·研究的目的和意义第18-20页
2.材料与方法第20-33页
   ·材料第20-21页
     ·植物材料第20页
     ·菌株和质粒第20页
     ·工具酶、试剂盒及试剂第20页
     ·引物合成及序列测定第20-21页
     ·主要仪器第21页
   ·实验方法第21-33页
     ·引物设计第21-22页
     ·组织表达分析第22-23页
     ·cDNA文库的构建第23-26页
     ·pGBKT7钓饵载体的构建第26-29页
     ·酵母的转化及"钓饵"可利用性验证第29-31页
     ·MATING及效率检测第31-32页
     ·基因的生物信息学分析第32-33页
3.结果与分析第33-52页
   ·RIN基因cDNA的克隆与表达分析第33-35页
     ·RIN基因cDNA的克隆与亚克隆第33页
     ·RIN基因的表达分析第33-35页
   ·Mating"钓饵"的构建第35-37页
     ·pGBKT7重组载体的构建第35-36页
     ·文库"钓饵"的生成第36-37页
   ·"钓饵"载体自激活和毒性验证第37-38页
     ·自激活验证第37页
     ·毒性验证第37-38页
   ·酵母双杂交文库的构建第38-42页
     ·酵母双杂交cDNA文库的生成第38-40页
     ·酵母双杂交GAL4 AD融合文库的构建第40-41页
     ·文库cDNA插入片段大小凝胶电泳检测第41-42页
   ·Mating第42-44页
     ·Mating效率检测第42-43页
     ·双杂交阳性菌落凝胶电泳检测第43-44页
   ·cDNA插入片段序列分析和功能预测第44-52页
     ·cDNA插入片段序列分析第44-45页
     ·cDNA插入片段功能预测分析第45-52页
4.讨论第52-57页
   ·转录因子作用机制的探讨第52-53页
   ·RIN基因果实成熟调控机制的假设第53-54页
   ·MIKC型MADS基因保守域结构功能在本实验中的讨论第54-55页
   ·酵母系统假阳性的探讨第55-56页
   ·后期工作展望第56-57页
参考文献第57-68页
致谢第68-69页
附录一:常用培养基及试剂的配制第69-71页
附录二:Mating序列原始信息第71-80页

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