| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌(Bt)及其杀虫晶体蛋白 | 第12-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌(Bt)概述 | 第12页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白及其基因的分类 | 第12-13页 |
| ·Cry1Ac杀虫蛋白的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·Cry1Ac杀虫蛋白的作用过程与杀虫机理 | 第14-15页 |
| ·转Bt基因水稻研究进展及其存在的问题 | 第15-16页 |
| ·昆虫对转BT基因作物抗性的产生和对策 | 第16-18页 |
| ·"高剂量/庇护所"策略(High-Dose/Refuge) | 第16-17页 |
| ·基因聚合策略 | 第17页 |
| ·融合基因的应用 | 第17-18页 |
| ·雪花莲凝集素 | 第18-20页 |
| ·雪花莲凝集素(GNA)概述 | 第18页 |
| ·GNA基因及其蛋白结构 | 第18-19页 |
| ·GNA的杀虫机理 | 第19页 |
| ·GNA杀虫活性及应用情况 | 第19-20页 |
| ·人工喂食GNA杀虫活性 | 第19-20页 |
| ·转GNA基因植物 | 第20页 |
| ·GNA对天敌昆虫的影响 | 第20页 |
| ·外源基因导入水稻的方法 | 第20-22页 |
| ·农杆菌介导的基因转化 | 第20-21页 |
| ·基因枪介导的基因转化 | 第21-22页 |
| ·其它方法 | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-49页 |
| ·实验材料 | 第24-32页 |
| ·目的基因 | 第24页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第24页 |
| ·农杆菌菌株 | 第24页 |
| ·植物表达载体 | 第24页 |
| ·受体植物材料 | 第24页 |
| ·供试昆虫 | 第24页 |
| ·酶、载体与相关试剂 | 第24-25页 |
| ·酶与载体 | 第24页 |
| ·质粒抽提试剂盒 | 第24-25页 |
| ·PCR产物纯化试剂盒 | 第25页 |
| ·凝胶回收试剂盒 | 第25页 |
| ·常用培养基与储存液 | 第25-26页 |
| ·常用培养基 | 第25页 |
| ·储存液 | 第25-26页 |
| ·组培用试剂与培养基 | 第26-32页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·储存液 | 第26-29页 |
| ·组培用培养基 | 第29-32页 |
| ·实验方法 | 第32-49页 |
| ·电转化 | 第32-34页 |
| ·制备电转化用大肠杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·电转化大肠杆菌步骤 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第34页 |
| ·原核克隆载体pCR2.1-Cry1Ac的构建 | 第34页 |
| ·原核克隆载体pCR2.1-GNA的构建 | 第34页 |
| ·原核表达载体pET11a-Cry1Ac-GNA的构建 | 第34页 |
| ·在大肠杆菌中表达融合基因蛋白 | 第34-35页 |
| ·Western杂交 | 第35页 |
| ·凝血活性分析 | 第35页 |
| ·生物活性测定 | 第35页 |
| ·克隆融合基因及Cry1Ac和GNA基因片段 | 第35-47页 |
| ·测序验证基因序列 | 第35-36页 |
| ·构建克隆载体pGEMT-Cry1Ac-GNA | 第36-38页 |
| ·构建克隆载体pGEMT-Cry1Ac | 第38-41页 |
| ·构建克隆载体pGEMT-GNA | 第41-44页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA1300s-Cry1Ac-GNA | 第44-45页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA1300s-Cry1Ac | 第45-46页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA1300s-GNA | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-67页 |
| ·在大肠杆菌中表达融合蛋白的Western检测 | 第49页 |
| ·融合蛋白的凝血活性测定 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白的生物活性测定 | 第50-51页 |
| ·PET11A-Cry1Ac-GNA测序 | 第51-53页 |
| ·克隆载体PGEMT-Cry1Ac-GNA的构建 | 第53-55页 |
| ·扩增融合基因(Cry1Ac/GNA) | 第53-54页 |
| ·载体pGEMT-Cry1Ac-GNA的检测 | 第54-55页 |
| ·克隆载体PGEMT-Cry1Ac的构建 | 第55-56页 |
| ·PCR克隆Cry1Ac基因 | 第55页 |
| ·载体pGEMT-Cry1Ac的检测 | 第55-56页 |
| ·克隆载体PGEMT-GNA的构建 | 第56-58页 |
| ·PCR克隆GNA基因 | 第56-57页 |
| ·载体pGEMT-GNA的检测 | 第57-58页 |
| ·克隆载体PGEMT-Cry1Ac-GNA测序 | 第58-60页 |
| ·植物表达载体PCAMBIA1300s-Cry1Ac-GNA的构建 | 第60-62页 |
| ·质粒PGEMT-Cry1Ac测序 | 第62页 |
| ·植物表达载体PCAMBIA1300s-Cry1Ac的构建 | 第62-64页 |
| ·克隆载体PGEMT-GNA测序 | 第64页 |
| ·植物表达载体PCAMBIA1300s-GNA的构建 | 第64-65页 |
| ·诱导愈伤及农杆菌介导的遗传转化 | 第65-66页 |
| ·初级转化子的PCR检测 | 第66-67页 |
| 4 讨论与展望 | 第67-71页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第67页 |
| ·PET11a-CrylAC-GNA测序结果中碱基突变问题 | 第67-68页 |
| ·融合基因在水稻中表达 | 第68-69页 |
| ·构建了三组转化载体 | 第68页 |
| ·转化子的初步检测 | 第68页 |
| ·转融合基因水稻可能产生的抗虫效应 | 第68-69页 |
| ·连接转化效率的影响因素 | 第69页 |
| ·外源基因片段大小的影响 | 第69页 |
| ·温度的影响 | 第69页 |
| ·个人对于水稻组培及转化过程的一些认识 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 附录1 | 第82页 |
| 附录2 | 第82-83页 |
| 附录3 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
