| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| 1 cDNA文库研究进展 | 第11-17页 |
| ·基因文库 | 第11页 |
| ·cDNA文库 | 第11-15页 |
| ·经典的cDNA文库 | 第12页 |
| ·均一化cDNA文库 | 第12页 |
| ·差减cDNA文库(subtractive cDNA library) | 第12-13页 |
| ·cDNA全长文库 | 第13-14页 |
| ·固相cDNA文库构建 | 第14-15页 |
| ·cDNA文库的应用 | 第15-16页 |
| ·克隆分离目的基因 | 第15页 |
| ·进行EST的开发 | 第15页 |
| ·开发SSR引物 | 第15-16页 |
| ·基因的时空表达研究 | 第16页 |
| ·从cDNA文库中分离获得全长基因的方法 | 第16-17页 |
| ·RACE法 | 第16页 |
| ·标记探针cDNA文库筛选法 | 第16-17页 |
| ·反式PCR | 第17页 |
| ·TAIL-PCR | 第17页 |
| ·cDNA文库的缺陷 | 第17页 |
| 2 花器官发育 | 第17-21页 |
| ·花发育ABC模型及其发展 | 第18-21页 |
| ·经典的ABC模型 | 第18页 |
| ·ABCD模型 | 第18-19页 |
| ·ABCDE模型 | 第19-20页 |
| ·四聚体模型 | 第20-21页 |
| 3 MADS-box基因的研究进展 | 第21-23页 |
| ·MADS-box基因的起源、分类及结构 | 第21-22页 |
| ·植物MADS-box基因的功能 | 第22-23页 |
| ·植物MADS-box基因与花的发育 | 第22页 |
| ·控制开花时间早晚 | 第22页 |
| ·植物MADS-box基因参与胚珠的发育 | 第22页 |
| ·植物MADS-box基因与果实发育 | 第22-23页 |
| ·植物MADS-box基因与根的发育 | 第23页 |
| 4 梅花的研究概况 | 第23-25页 |
| ·梅花品种选育 | 第23-24页 |
| ·繁殖与栽培生理 | 第24页 |
| ·营养繁殖 | 第24页 |
| ·花期调控 | 第24页 |
| ·梅花花色生理 | 第24页 |
| ·梅花分子标记研究 | 第24-25页 |
| 5 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 梅花花器官cDNA文库的构建 | 第26-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-36页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·Biozol法提取总RNA | 第27页 |
| ·SDS法提取总RNA | 第27页 |
| ·CTAB法提取总RNA | 第27-28页 |
| ·mRNA的分离 | 第28-29页 |
| ·cDNA文库构建 | 第29-36页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·第二链的合成 | 第29-30页 |
| ·蛋白酶K消化 | 第30页 |
| ·Sfi Ⅰ酶消化 | 第30-31页 |
| ·CHROMA SPIN-400 Columns层析柱分级分离cDNA片段 | 第31-32页 |
| ·cDNA与λTrip1Ex2载体的连接 | 第32页 |
| ·连接产物的包装 | 第32页 |
| ·XL-1 Blue菌株的培养 | 第32-33页 |
| ·非扩增文库滴度的测定 | 第33页 |
| ·噬菌体文库的扩增 | 第33-34页 |
| ·扩增文库滴度的测定 | 第34页 |
| ·非扩增文库噬菌体的环化 | 第34-35页 |
| ·cDNA文库插入片段的菌落PCR检测 | 第35页 |
| ·有效EST的获得和基因功能分类 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-43页 |
| ·不同方法提取的总RNA | 第36-37页 |
| ·mRNA的分离 | 第37页 |
| ·双链cDNA合成及双链cDNA合成的最佳循环数的确定 | 第37-38页 |
| ·ds-cDNA的分级同收 | 第38页 |
| ·cDNA文库的滴度和重组率 | 第38-39页 |
| ·文库插入片段大小的检测 | 第39-40页 |
| ·有效EST序列的获得和基因功能分类 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| ·梅花总RNA的提取 | 第43页 |
| ·全长cDNA构建 | 第43-44页 |
| ·有效EST序列的获得和基因功能分类 | 第44-45页 |
| 第三章 B类、C类花发育相关基因的克隆及PmAP_3、pmpI超量表达载体的构建 | 第45-63页 |
| 1 材料与方法 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·酶利生化试剂 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-50页 |
| ·梅花花RNA提取 | 第45页 |
| ·mRNA的分离 | 第45-46页 |
| ·双链cDNA的合成与回收 | 第46页 |
| ·B类、C类花发育相关基因3'端片段克隆 | 第46页 |
| ·PmAP3、PmPI、PmAG基因5'端片段克隆 | 第46-47页 |
| ·PmAP3、PmPI5'基因5'端片段扩增 | 第46-47页 |
| ·PmAG基因5'端片段的扩增 | 第47页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接、转化和测序 | 第47-48页 |
| ·PmAP3、PmPI、PmAG全长的拼接 | 第48页 |
| ·PmAP_3、PmPl超量表达载体的构建 | 第48-50页 |
| ·PmAP_3、PmPI编码区的克隆 | 第48页 |
| ·带有目的片段的pMD18-T质粒和表达载体质粒的提取 | 第48-49页 |
| ·pMD18-T质粒和2300表达载体质粒的酶切、回收 | 第49页 |
| ·目的片段和酶切载体的连接、转化 | 第49页 |
| ·重组子的鉴定筛选 | 第49页 |
| ·转化农杆菌 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-61页 |
| ·B类、C类花发育相关基因克隆 | 第50-59页 |
| ·B类、C类花发育相关基因3'端片段克隆 | 第50页 |
| ·PmAP3、PmPI基因5'端片段扩增 | 第50-51页 |
| ·PmAG基因5'端片段扩增 | 第51-52页 |
| ·PmAP_3、PmPI、PmAG全长的拼接 | 第52-59页 |
| ·PmAP3、PmPI超量表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·PmAP_3、PmPI编码区的克隆 | 第59页 |
| ·质粒的酶切 | 第59-60页 |
| ·重组表达载体的PCR和酶切检测 | 第60-61页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌PCR检测 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| ·基因克隆 | 第61-62页 |
| ·载体构建 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
