| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| ·基因在B. subtilis 中的过量表达 | 第9-12页 |
| ·启动子 | 第9-10页 |
| ·核糖体结合位点 | 第10-11页 |
| ·起始密码子 | 第11页 |
| ·终止子 | 第11页 |
| ·mRNA 稳定性对于表达效率的影响 | 第11-12页 |
| ·枯草芽孢杆菌mRNA 稳定性的研究进展 | 第12-18页 |
| ·aprE 前导区序列分析 | 第13页 |
| ·B. subtilis ermC m RNA 稳定性机制 | 第13-15页 |
| ·B. subtilis trp mRNA 稳定性的机理 | 第15-17页 |
| ·Phage SP82 m RNA 稳定性的机理 | 第17页 |
| ·B. subtilis mRNA 被降解的机制 | 第17-18页 |
| ·枯草芽孢杆菌的lipA 基因 | 第18-24页 |
| ·枯草芽孢杆菌 | 第18-19页 |
| ·枯草杆菌lipA 基因及其编码产物 | 第19-20页 |
| ·LipA 的分泌 | 第20-24页 |
| ·枯草杆菌脂肪酶的生产和应用 | 第24-25页 |
| ·枯草杆菌脂肪酶的过量表达 | 第24页 |
| ·枯草芽孢杆菌脂肪酶的应用 | 第24-25页 |
| ·本文的研究内容和目的 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要药品 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·PCR 引物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·B. subtilis 染色体DNA 提取 | 第30-31页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第31页 |
| ·普通PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·三个DNA 片段的重叠PCR 拼接 | 第32-34页 |
| ·DNA 的纯化 | 第34页 |
| ·DNA 片段的切胶回收 | 第34-35页 |
| ·DNA 的纯化 | 第35页 |
| ·DNA 的酶切 | 第35页 |
| ·DNA 连接反应 | 第35-36页 |
| ·B. subtilis DB104 原生质体的制备与转化 | 第36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| ·E. coli 感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·E. coli 感受态细胞的转化 | 第37页 |
| ·B. subtilis 的Spizizen 转化 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-56页 |
| ·lipA 启动子的预测和表达元件分析 | 第39-42页 |
| ·lipA 基因启动子预测 | 第39-40页 |
| ·lipA 基因mRNA 前导区的二级结构预测 | 第40-41页 |
| ·lipA 基因表达元件的分析 | 第41-42页 |
| ·lipA 基因表达元件的修饰方案 | 第42-45页 |
| ·出发菌株的确定 | 第45-47页 |
| ·L1 和L2 片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·L1 和L2 片段的测序结果分析 | 第46-47页 |
| ·重组片段Lu-e-Lp 的原生质体转化 | 第47-50页 |
| ·PCR 扩增Lu、Ld 和e 片段 | 第47页 |
| ·两步法重叠 PCR 拼接Lu-e-Lp 片段 | 第47-48页 |
| ·B. subtilis DB104 原生质体转化 | 第48-49页 |
| ·转化子的PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pUC18-LE 的感受态转化 | 第50-56页 |
| ·Lu-e-Ld 片段两端引入酶切位点 | 第51-52页 |
| ·质粒pUC18 的提取及验证 | 第52页 |
| ·重组质粒pUC18-LE 的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pUC18-LE 的转化 | 第53-54页 |
| ·转化子的表型验证 | 第54-55页 |
| ·转化子的PCR 验证 | 第55-56页 |
| 第四章 结论与展望 | 第56-57页 |
| ·主要结论 | 第56页 |
| ·展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
