利用重叠延伸PCR技术在酿酒酵母中构建木糖代谢相关基因
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-25页 |
| ·纤维素乙醇 | 第7-9页 |
| ·纤维素乙醇概述 | 第7-9页 |
| ·纤维素乙醇面临的困难和预解决的问题 | 第9页 |
| ·五、六碳糖的利用 | 第9-17页 |
| ·五、六碳糖的代谢工程菌 | 第9-12页 |
| ·五、六碳糖的代谢途径及异源引入 | 第12-15页 |
| ·木糖和葡萄糖的转运 | 第15页 |
| ·细胞氧化还原的平衡 | 第15-16页 |
| ·其他相关途径及改造 | 第16-17页 |
| ·合成生物学 | 第17-18页 |
| ·重叠延伸PCR 技术 | 第18-23页 |
| ·聚合酶链式反应PCR | 第18-19页 |
| ·重叠延伸PCR | 第19-23页 |
| ·本课题的研究内容与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 木糖代谢相关功能基因的克隆 | 第25-42页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第26-28页 |
| ·主要实验仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·菌种的保存、活化与培养 | 第29页 |
| ·基因组的提取 | 第29-30页 |
| ·常规PCR 及菌落PCR 方法 | 第30-31页 |
| ·核酸电泳、DNA 片段、PCR 产物的回收 | 第31-32页 |
| ·酵母单倍体的拆分 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-41页 |
| ·酵母、粗糙脉胞菌基因组提取 | 第33-34页 |
| ·酵母单倍体的拆分及PCR 验证 | 第34-36页 |
| ·酵母、粗糙脉胞菌木糖代谢相关基因的克隆 | 第36-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 重叠延伸PCR 方法实现目标基因的连接 | 第42-59页 |
| ·材料与方法 | 第43-44页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第43-44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·菌种活化培养 | 第44-45页 |
| ·重叠延伸PCR | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态制备方法 | 第46页 |
| ·大肠杆菌转化方法及TA 克隆筛选 | 第46-47页 |
| ·TA 克隆转化子的验证 | 第47页 |
| ·酵母细胞醋酸锂转化方法 | 第47-48页 |
| ·其他实验方法参见2.2 实验方法 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-58页 |
| ·启动子PGK 和各个功能基因的连接 | 第48-53页 |
| ·TA 快速克隆 | 第53-54页 |
| ·外源基因重组到酵母基因组上的初步探索 | 第54-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第四章 结论和展望 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
