| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一部分 研究背景 | 第11-33页 |
| 一、SR 蛋白功能及研究进展 | 第11-18页 |
| （一） 关于SR 蛋白 | 第11-13页 |
| （二） SR 蛋白在细胞中的定位 | 第13页 |
| （三） SR 蛋白在剪接反应中的作用 | 第13-15页 |
| （四） SR 的其他功能 | 第15-16页 |
| （五） SR 蛋白的功能受磷酸化调节 | 第16-18页 |
| 二、SR 蛋白激酶功能及研究进展 | 第18-23页 |
| （一） SR 蛋白激酶 | 第18-20页 |
| （二） SR 蛋白激酶的分类 | 第20-21页 |
| （三） SR 蛋白激酶的功能 | 第21-23页 |
| 三、14-3-3 蛋白功能及研究进展 | 第23-27页 |
| （一） 14-3-3 蛋白的理化性质 | 第23-25页 |
| （二） 14-3-3 蛋白的功能 | 第25-27页 |
| 四、本课题组前期研究基础 | 第27-30页 |
| 五、 本文研究内容和意义 | 第30-33页 |
| （一） 立题依据 | 第30-31页 |
| （二） 本文的研究内容和意义 | 第31-33页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第33-52页 |
| 一、实验材料 | 第33-36页 |
| （一） 质粒 | 第33-35页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第35页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第35页 |
| （四） 试剂 | 第35页 |
| （五） 菌株 | 第35-36页 |
| 二、实验方法 | 第36-52页 |
| （一） 多头绒泡菌的培养 | 第36页 |
| （二） 多头绒泡菌总RNA 的提取和反转录 | 第36-38页 |
| （三） 酵母的培养 | 第38-39页 |
| （四） 质粒的构建 | 第39-46页 |
| （五） 重组蛋白的表达纯化与Western blotting | 第46-48页 |
| （六） 放射自显影检测体外磷酸化反应 | 第48-49页 |
| （七） 通过激光扫描共聚焦显微镜观察蛋白在细胞内的分布，并检测作用强度 | 第49-50页 |
| （八） 酵母双杂交 | 第50-52页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第52-74页 |
| 一、PSR 蛋白的完整cDNA 和重组表达 | 第52-55页 |
| （一） PSR cDNA 的获得 | 第52-54页 |
| （二） PSR 的重组表达 | 第54-55页 |
| 二、PSR 的磷酸化 | 第55-61页 |
| （一） PSR 是PSRPK 的磷酸化底物 | 第55-56页 |
| （二） PSR的磷酸化与其RS motif和Docking motif密切相关 | 第56-59页 |
| （三） PSRPK的ABR和AS结构域影响其对PSR的磷酸化作用 | 第59-60页 |
| （四） PSRPK的Ly586和Asp188影响其对PSR的磷酸化活性 | 第60-61页 |
| 三、PSR 在细胞内的分布 | 第61-74页 |
| （一） PSR 在哺乳细胞中的分布受P14-3-3 的调节 | 第61-64页 |
| （二） PSR的RS和Docking motif 影响其与P14-3-3的相互作用 | 第64-67页 |
| （三） PSR 与 P14-3-3 的相互作用受 P14-3-3 N-端 76-109aa 和 C-端 217-237aa 的调节 | 第67-70页 |
| （四） PSR 与 P14-3-3 的相互作用受P14-3-3 潜在磷酸化位点影响 | 第70-74页 |
| 第四部分 讨论 | 第74-82页 |
| 一、多头绒泡菌PSR 是一种SR 蛋白 | 第74-76页 |
| 二、PSR 的连续RS 重复序列是其被磷酸化的必要条件 | 第76-78页 |
| 三、PSRPK 的ABR 和AS 是影响其磷酸化功能的关键结构 | 第78-80页 |
| 四、PSR 与P14-3-3 蛋白的相互作用 | 第80-82页 |
| 主要结论和创新点 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 附录 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第96页 |
| 承担相关科研项目 | 第96页 |
