| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·脂肪酶 | 第11-17页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶基因研究 | 第13页 |
| ·脂肪酶的性质研究 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的应用研究 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶的研究展望 | 第16-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-26页 |
| ·毕赤酵母的生物学特性 | 第17-18页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第18-21页 |
| ·影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第21-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统存在的问题 | 第24-26页 |
| 第二章 CALB 脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达与纯化 | 第26-47页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌种和载体 | 第26页 |
| ·工具酶 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·其他试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·常用培养基和缓冲液及处理 | 第27-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·目的基因的获得及克隆 | 第29-31页 |
| ·CALB 在毕赤酵母中组成型表达 | 第31-35页 |
| ·CALB 在毕赤酵母中组成型表达条件优化 | 第35-36页 |
| ·CALB 脂肪酶的纯化 | 第36页 |
| ·结果和讨论 | 第36-45页 |
| ·重组质粒载体的提取、酶切验证 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的线性化和去磷酸化 | 第37页 |
| ·毕赤酵母 GS115 的点种分离纯化 | 第37-39页 |
| ·重组酵母的获得与鉴定 | 第39页 |
| ·酵母转化子的遗传稳定性分析 | 第39-40页 |
| ·分光光度法测脂肪酶水解活力的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·BCA 试剂盒测蛋白浓度标准曲线 | 第41页 |
| ·组成型表达CALB 的摇瓶发酵条件优化 | 第41-44页 |
| ·毕赤酵母组成型表达系统得到的CALB 的分离与纯化 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第三章 CALB 脂肪酶在毕赤酵母中的诱导型表达和纯化 | 第47-66页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料 | 第47-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·工具酶 | 第47页 |
| ·引物 | 第47页 |
| ·其他试剂 | 第47-48页 |
| ·仪器设备 | 第48页 |
| ·常用培养基和缓冲液及处理 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-55页 |
| ·目的基因的获得及克隆 | 第49页 |
| ·脂肪酶基因在毕赤酵母中的诱导型表达 | 第49-52页 |
| ·诱导型表达条件优化 | 第52-53页 |
| ·CALB 脂肪酶的纯化 | 第53页 |
| ·CALB 脂肪酶的诱导型高密度发酵 | 第53-55页 |
| ·结果和讨论 | 第55-65页 |
| ·重组质粒载体的提取、酶切验证 | 第55页 |
| ·重组质粒的线性化和去磷酸化 | 第55-56页 |
| ·毕赤酵母 GS115 的点种分离纯化 | 第56页 |
| ·重组酵母的高抗筛选 | 第56页 |
| ·诱导型重组酵母的获得和鉴定 | 第56-57页 |
| ·calB 基因在重组毕赤酵母中的诱导型表达高产菌株的筛选 | 第57-58页 |
| ·Bradford 法测定总蛋白浓度的标准曲线的绘制 | 第58-59页 |
| ·摇瓶发酵条件优化 | 第59-62页 |
| ·诱导型表达的CALB 的纯化 | 第62-63页 |
| ·重组毕赤酵母高密度发酵产CALB | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第四章 CALB 脂肪酶的酶学特性分析 | 第66-70页 |
| ·材料和方法 | 第66页 |
| ·材料和仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-69页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第66-67页 |
| ·酶的热稳定性 | 第67-68页 |
| ·CALB 最适反应pH 值 | 第68-69页 |
| ·pH 稳定性 | 第69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
