| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| ·类胡萝卜素概述 | 第12-20页 |
| ·结构与特性 | 第12-13页 |
| ·生物功能 | 第13-15页 |
| ·类胡萝卜素的生物合成 | 第15-16页 |
| ·类胡萝卜素的基因工程 | 第16-20页 |
| ·杜氏盐藻 | 第20-21页 |
| ·盐藻的生物学性质 | 第20页 |
| ·盐藻积累β-胡萝卜素的条件 | 第20页 |
| ·国内外研究现状 | 第20-21页 |
| ·本论文研究的目的、主要内容和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 杜氏盐藻番茄红素β-环化酶基因ORF的克隆 | 第23-38页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·盐藻与培养液 | 第23-24页 |
| ·菌种及载体 | 第24页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·盐藻的培养 | 第26-27页 |
| ·盐藻Total RNA的提取与测定 | 第27-28页 |
| ·基因扩增 | 第28-33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·盐藻Total RNA的提取与测定 | 第33-34页 |
| ·LycB ORF的扩增 | 第34页 |
| ·质粒pMD20-T-LycB的鉴定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·PCR操作 | 第36页 |
| ·基因扩增及鉴定 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组质粒pACCRT-EIB-LycB的构建 | 第38-46页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·试剂配制 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·pMD-20T-LycB质粒提取 | 第39-40页 |
| ·LycB基因ORF的PCR扩增 | 第40页 |
| ·目的基因的纯化 | 第40页 |
| ·目的基因的酶切及平滑化 | 第40-41页 |
| ·目的基因与载体pACCRT-EIB的连接 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-44页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·pACCRT-EIB载体DNA的限制性酶切 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pACCRT-EIB-LycB的鉴定 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·引物和Taq聚合酶的选择 | 第44页 |
| ·表达载体及宿主菌选择 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 重组质粒pACCRT-EIB-LycB的原核表达 | 第46-57页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第46页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| ·主要生化试剂 | 第46-47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第48页 |
| ·重组质粒表达类胡萝卜素的鉴定 | 第48-50页 |
| ·结果 | 第50-54页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白表达 | 第50页 |
| ·重组基因工程菌表型 | 第50-51页 |
| ·紫外分光光度计测β-胡萝卜素含量 | 第51-53页 |
| ·HPLC检测β-胡萝卜素 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·基因工程菌的蛋白表达 | 第54-55页 |
| ·基因工程菌的表型及β-胡萝卜素的提取 | 第55页 |
| ·β-胡萝卜素的鉴定 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 基因工程菌β-胡萝卜素培养条件研究 | 第57-70页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·仪器设备 | 第57页 |
| ·生化试剂 | 第57-58页 |
| ·主要培养基配制 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·工程菌的培养 | 第58页 |
| ·工程菌累积β-胡萝卜素的条件研究 | 第58-59页 |
| ·响应面法最适培养基影响因子的确定 | 第59页 |
| ·响应因素水平的优化 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-69页 |
| ·培养基对菌体生长的影响 | 第59-61页 |
| ·培养温度对菌体合成β-胡萝卜素的影响 | 第61页 |
| ·有机溶剂浸提的选择 | 第61-62页 |
| ·响应面法最适培养基成分的确定 | 第62-64页 |
| ·响应面分析 | 第64-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
