| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第12-18页 |
| ·宿主与筛选标记 | 第13-14页 |
| ·转化方法 | 第14-17页 |
| ·表达载体 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶概述 | 第18-20页 |
| ·脂肪酶的酶学性质 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第19-20页 |
| ·国内外脂肪酶的研究进展 | 第20页 |
| ·课题来源与研究内容 | 第20-21页 |
| ·本课题来源 | 第20页 |
| ·本课题研究内容 | 第20-21页 |
| ·本课题研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 野生型曲霉宿主菌的构建及快速筛选方法的建立 | 第22-32页 |
| ·引言 | 第22-23页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·主要试剂及配方 | 第23页 |
| ·主要培养基配方 | 第23-24页 |
| ·菌种材料及质粒 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-26页 |
| ·米曲霉 IFO4177 对吡啶硫胺素（PT）的耐受性 | 第24页 |
| ·米曲霉 IFO4177 对潮霉素 B 的耐受性 | 第24页 |
| ·泡盛曲霉 CBS115.52 对潮霉素 B 的耐受性 | 第24页 |
| ·菌落PCR 快速检测转化子方法建立 | 第24-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-31页 |
| ·吡啶硫胺素（PT）抗性宿主的筛选 | 第26-27页 |
| ·潮霉素（hygB）抗性宿主的筛选 | 第27-28页 |
| ·菌落PCR 快速检测方法的建立 | 第28-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 表达载体的构建及米曲霉的转化方法的探索 | 第32-51页 |
| ·引言 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第33-35页 |
| ·主要试剂及配方 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| ·主要培养基 | 第34页 |
| ·主要菌种 | 第34页 |
| ·转化用质粒 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-41页 |
| ·gateway 克隆技术构建pHGW-脂肪酶表达载体 | 第35-36页 |
| ·转化农杆菌 | 第36-38页 |
| ·米曲霉原生质体转化 | 第38-40页 |
| ·农杆菌介导的米曲霉转化 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-49页 |
| ·农杆菌双元载体构建 | 第41-43页 |
| ·米曲霉原生质体制备结果 | 第43-44页 |
| ·米曲霉 IFO4177 共转化 | 第44-46页 |
| ·pPTR-脂肪酶质粒转化米曲霉 IFO4177 | 第46-47页 |
| ·米曲霉 IFO4177 线性载体转化 | 第47-48页 |
| ·农杆菌介导米曲霉转化结果 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导的泡盛曲霉转化及转化子的鉴定 | 第51-70页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-56页 |
| ·主要试剂及配方 | 第51-54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·农杆菌介导的泡盛曲霉转化 | 第56页 |
| ·菌落PCR 检测转化子 | 第56页 |
| ·基因组提取 | 第56-57页 |
| ·PCR 检测目的基因 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR 检测目的基因的表达 | 第58页 |
| ·胞外蛋白提取及蛋白电泳 | 第58-60页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白 | 第60页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第60-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-69页 |
| ·农杆菌介导泡盛曲霉转化结果 | 第61-62页 |
| ·PCR 检测目的基因结果及测序结果 | 第62-66页 |
| ·荧光定量PCR 检测结果 | 第66-67页 |
| ·蛋白电泳和Western blot 检测目的蛋白 | 第67-68页 |
| ·脂肪酶活力测定结果 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
