| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-22页 |
| ·代谢工程的概念与方法 | 第9页 |
| ·基因敲除的操作流程及策略选择 | 第9-12页 |
| ·基因敲除的基本流程 | 第9-10页 |
| ·基因敲除的策略选择 | 第10-12页 |
| ·基因敲除技术的应用及发展前景 | 第12页 |
| ·透明质酸分布及结构 | 第12-13页 |
| ·透明质酸的理化性质与生理功能 | 第13-14页 |
| ·透明质酸的生物合成 | 第14-15页 |
| ·透明质酸的应用领域 | 第15-18页 |
| ·透明质酸在化妆品中的应用 | 第15页 |
| ·透明质酸在保健食品中的应用 | 第15-16页 |
| ·透明质酸在关节病中应用 | 第16页 |
| ·透明质酸在眼科中应用 | 第16-17页 |
| ·透明质酸在其它外科手术中的应用 | 第17页 |
| ·透明质酸在给药体系中的应用 | 第17页 |
| ·透明质酸在疾病检测中的应用 | 第17-18页 |
| ·透明质酸的制备方法 | 第18-20页 |
| ·本课题的研究思路 | 第20-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-37页 |
| ·试验材料和仪器设备 | 第22-23页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·主要培养基及溶液配方 | 第23-25页 |
| ·主要培养基配制 | 第23-24页 |
| ·试验试剂及药品的配制 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-28页 |
| ·菌种培养方法 | 第25页 |
| ·兽疫链球菌基因组DNA 的提取 | 第25页 |
| ·胶回收DNA（试剂盒操作说明） | 第25-26页 |
| ·DNA 的酶切与连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆的筛选及验证 | 第27页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取（试剂盒操作说明） | 第27-28页 |
| ·Hyl 基因的克隆及测序 | 第28-29页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第28页 |
| ·Hyl 基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·Hyl-1 基因的克隆及测序 | 第29-31页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第29页 |
| ·目的片段Hyl-1 的克隆 | 第29-31页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第31-34页 |
| ·反向PCR 扩增线性化重组质粒pMD19T-Hyl-1 | 第31页 |
| ·PCR 扩增AMP 抗性基因 | 第31-32页 |
| ·基因敲除载体pMD19T-SA 和pBR322-SA 的构建 | 第32-34页 |
| ·兽疫链球菌的转化 | 第34页 |
| ·转化子抗药性分析 | 第34-35页 |
| ·重组菌的验证 | 第35-37页 |
| ·用PCR 检验基因的变化 | 第35页 |
| ·酶活测定方法 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·兽疫链球菌总DNA 的提取 | 第37页 |
| ·Hyl 基因的克隆 | 第37-39页 |
| ·Hyl-1 基因片段的克隆 | 第39-40页 |
| ·基因敲除载体pMD19T-SA 与 pBR322-SA 的构建及鉴定 | 第40-43页 |
| ·基因敲除载体pMD19T-SA 的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| ·基因敲除载体pBR322-SA 的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| ·敲除载体的转化及转化子的验证 | 第43-46页 |
| ·用经改造的质粒转化兽疫链球菌，AMPR抗性筛选的计数结果 | 第43-44页 |
| ·用PCR 检验基因的变化 | 第44-46页 |
| ·转化子的透明质酸分解酶（Hyl）酶活测定 | 第46-47页 |
| ·氨基葡萄糖的反应标准曲线 | 第46页 |
| ·酶活测定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·透明质酸分解酶及其基因的克隆 | 第47页 |
| ·透明质酸分解酶基因的灭活 | 第47-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录1 pBR322 质粒图谱 | 第56-57页 |
| 附录2 pMD19-T 质粒图谱 | 第57-58页 |
| 附录3 Hyl 基因测序结果 | 第58-60页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
