| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第9-10页 |
| 综述 犬细小病毒研究进展 | 第10-21页 |
| 1 犬细小病毒形态 | 第10页 |
| 2 CPV生物学特性 | 第10-11页 |
| 2.1 CPV的血凝特性 | 第10页 |
| 2.2 CPV的培养特性 | 第10-11页 |
| 3 起源与进化 | 第11-12页 |
| 4 CPV编码的蛋白 | 第12页 |
| 5 CPV流行病学与致病机理 | 第12-14页 |
| 5.1 CPV流行病学 | 第12-13页 |
| 5.2 CPV致病机理 | 第13-14页 |
| 6 临床症状 | 第14页 |
| 6.1 胃肠炎型 | 第14页 |
| 6.2 心肌炎型 | 第14页 |
| 7 CPV的诊断 | 第14-18页 |
| 7.1 临床症状初判 | 第15页 |
| 7.2 病毒分离鉴定 | 第15-16页 |
| 7.3 血凝与血凝抑制 | 第16页 |
| 7.4 电镜观察 | 第16页 |
| 7.5 免疫胶体金法 | 第16-17页 |
| 7.6 聚合酶链式反应 | 第17页 |
| 7.7 酶联级免疫吸附试验 | 第17页 |
| 7.8 动物感染试验 | 第17-18页 |
| 7.9 血常规检查 | 第18页 |
| 8 预防与治疗 | 第18-20页 |
| 8.1 预防 | 第18-19页 |
| 8.1.1 灭活疫苗 | 第18页 |
| 8.1.2 弱毒疫苗 | 第18-19页 |
| 8.1.3 核酸疫苗 | 第19页 |
| 8.1.4 亚单位疫苗 | 第19页 |
| 8.2 治疗 | 第19-20页 |
| 8.2.1 对症治疗 | 第19页 |
| 8.2.2 特异性治疗 | 第19-20页 |
| 9 研究背景与目的意义 | 第20-21页 |
| 第一章 犬细小病毒2a亚型VP2蛋白的原核表达与纯化 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-29页 |
| 2.1 VP2基因重组原核表达载体的构建与鉴定 | 第23-26页 |
| 2.1.1 VP2基因与pET-32a载体的双酶切 | 第23-24页 |
| 2.1.2 酶切产物的回收 | 第24页 |
| 2.1.3 VP2基因与pET-32a载体的连接 | 第24-25页 |
| 2.1.4 转化 | 第25页 |
| 2.1.5 菌液PCR鉴定 | 第25页 |
| 2.1.6 重组原核表达质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.1.7 重组克隆载体的双酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.1.8 重组表达载体的测序 | 第26页 |
| 2.2 VP2蛋白的原核表达 | 第26-28页 |
| 2.2.1 IPTG浓度的优化 | 第26-28页 |
| 2.2.2 诱导温度的优化 | 第28页 |
| 2.2.3 诱导时间的优化 | 第28页 |
| 2.2.4 重组蛋白表达形式分析 | 第28页 |
| 2.3 重组蛋白的纯化 | 第28页 |
| 2.4 重组蛋白的Western blotting分析 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-34页 |
| 3.1 VP2基因重组原核表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2 His-VP2重组蛋白表达条件的优化 | 第30-32页 |
| 3.2.1 .IPTG诱导浓度的优化 | 第30-31页 |
| 3.2.2 诱导温度的优化 | 第31页 |
| 3.2.3 诱导时间的优化 | 第31-32页 |
| 3.2.4 VP2蛋白可溶性分析 | 第32页 |
| 3.3 重组蛋白的纯化结果 | 第32-33页 |
| 3.4 VP2蛋白的Western Blot结果 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 犬细小病毒VP2蛋白多抗血清的制备 | 第36-45页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 1.1 实验动物 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 1.3 主要耗材 | 第36-37页 |
| 1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-40页 |
| 2.1 VP2蛋白透析复性 | 第37页 |
| 2.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第37-38页 |
| 2.3 免疫动物 | 第38-40页 |
| 2.3.1 实验动物的免疫 | 第38页 |
| 2.3.2 血清ELISA检测 | 第38-39页 |
| 2.3.3 高免血清的Western-bloting分析 | 第39-40页 |
| 2.3.4 抗体血清的制备 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| 3.1 标准曲线的绘制 | 第40-41页 |
| 3.2 抗体浓度的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.3 ELISA血清效价测定 | 第42页 |
| 3.3.1 高免血清的Western-bloting分析 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 免疫血清疗效研究 | 第45-60页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 毒株与细胞 | 第45页 |
| 1.2 实验动物 | 第45页 |
| 1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 1.4 主要耗材 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| 2.1 相关溶液的配制 | 第46页 |
| 2.2 F81细胞的培养 | 第46-47页 |
| 2.3 CPV毒株采集与病料处理 | 第47页 |
| 2.4 病毒的分离与增殖 | 第47页 |
| 2.5 病毒的鉴定 | 第47-50页 |
| 2.5.1 血凝(HA)与血凝抑制(HI)实验 | 第47-48页 |
| 2.5.2 血凝抑制实验(HI) | 第48-49页 |
| 2.5.3 PCR方法扩增CPVNS1基因 | 第49-50页 |
| 2.5.4 TCID50的测定 | 第50页 |
| 2.6 犬的攻毒实验 | 第50-51页 |
| 2.7 攻毒犬的血清疗效观察 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-57页 |
| 3.1 CPV的分离 | 第51-52页 |
| 3.2 CPV的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.2.1 血凝试验 | 第52页 |
| 3.2.2 PCR扩增结果 | 第52-53页 |
| 3.2.3 TCID50的测定 | 第53-54页 |
| 3.3 犬的攻毒试验 | 第54-56页 |
| 3.3.1 临床症状 | 第54页 |
| 3.3.2 血常规检测 | 第54页 |
| 3.3.3 CPV胶体金试纸板检测 | 第54-55页 |
| 3.3.4 尸体解剖 | 第55-56页 |
| 3.3.5 心脏的病理切片 | 第56页 |
| 3.4 病犬治疗 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献(References) | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
