| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 论文综述 | 第12-29页 |
| 一 真菌次生代谢产物及其功能简介 | 第12-16页 |
| 二 真菌次生代谢产物的调控 | 第16-27页 |
| 1 全局以及特异通路调控 | 第16-21页 |
| 1.1 全局调控因子 | 第16-19页 |
| 1.2 特异基因簇调控因子 | 第19-21页 |
| 2 信号转导通路 | 第21-24页 |
| 3 表观遗传调控 | 第24-27页 |
| 三 总结 | 第27-29页 |
| 第二章 少孢节丛孢中生物合成相关基因的功能研究 | 第29-109页 |
| 引言 | 第29-31页 |
| 一 预测及筛选方法 | 第31页 |
| 二 预测结果 | 第31-43页 |
| 1 少孢节丛孢中生物合成基因预测及筛选 | 第31-33页 |
| 2 靶标基因功能分析 | 第33-43页 |
| 2.2.1 215g21蛋白的氨基酸序列分析 | 第33-35页 |
| 2.2.2 43g51蛋白的氨基酸序列分析 | 第35-37页 |
| 2.2.3 54g811蛋白的氨基酸序列分析 | 第37-39页 |
| 2.2.4 76g605蛋白的氨基酸序列分析 | 第39-41页 |
| 2.2.5 215g535蛋白的氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| 三 所选基因的载体构建及敲除 | 第43-56页 |
| 1 实验材料及方法 | 第43-45页 |
| 1.1 所用菌株与质粒 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂与试剂盒 | 第43-44页 |
| 1.3 培养基与试剂 | 第44-45页 |
| 1.4 设备与仪器 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-56页 |
| 2.1 引物设计 | 第45-49页 |
| 2.2 敲除载体构建 | 第49-52页 |
| 2.2.1 质粒详情 | 第49-51页 |
| 2.2.2 上下游片段与质粒连接 | 第51-52页 |
| 2.3 原生质体制备和转化 | 第52-56页 |
| 2.3.1 原生质体转化替换原理 | 第52-55页 |
| 2.3.2 原生质体制备及转化 | 第55-56页 |
| 2.4 转化子筛选验证 | 第56页 |
| 四 实验结果及分析 | 第56-106页 |
| 1. 构建敲除载体及突变菌株筛选验证 | 第56-61页 |
| 1.1 215g21敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第56-57页 |
| 1.2 43g51敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第57-58页 |
| 1.3 54g811敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第58-59页 |
| 1.4 76g605敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第59-60页 |
| 1.5 215g535敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第60-61页 |
| 2 突变菌株与野生菌株表型及化学分析 | 第61-106页 |
| 2.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 2.1.1 实验线虫及菌株 | 第61页 |
| 2.1.2 培养基、试剂及材料 | 第61-62页 |
| 2.1.3 设备及仪器 | 第62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 2.2.1 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株形态和生长速率比较 | 第62页 |
| 2.2.2 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株孢子产量和孢子萌发率比较 | 第62-63页 |
| 2.2.3 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株捕器产量及捕食线虫能力比较 | 第63-64页 |
| 2.2.4 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株次生代谢产物化学图谱比较及分析 | 第64-65页 |
| 2.3 实验结果和分析 | 第65-106页 |
| 2.3.1 突变菌株△215g21与野生菌株表型及化学图谱比较与分析 | 第65-74页 |
| 2.3.2 突变菌株△43g51与野生菌株表型及化学图谱比较与分析 | 第74-81页 |
| 2.3.3 突变菌株△54g811与野生菌株表型及化学图谱比较与分析 | 第81-89页 |
| 2.3.4 突变菌株△76g605与野生菌株表型及化学图谱比较与分析 | 第89-97页 |
| 2.3.5 突变菌株△215g535与野生菌株表型及化学图谱比较与分析 | 第97-106页 |
| 三 小结与讨论 | 第106-109页 |
| 第三章 嗜热踝节菌突变菌株的构建初探 | 第109-156页 |
| 引言 | 第109-111页 |
| 一 预测及筛选方法 | 第111页 |
| 二 预测结果 | 第111-126页 |
| 1 嗜热踝节菌中生物合成基因预测 | 第111页 |
| 2 本论文研究的嗜热踝节菌生物合成基因的筛选与分析 | 第111-126页 |
| 2.1 基因筛选 | 第111-112页 |
| 2.2 所选基因功能及同源基因聚类分析 | 第112-126页 |
| 2.2.1 Ku70基因的氨基酸序列分析 | 第112-114页 |
| 2.2.2 ER基因的氨基酸序列分析 | 第114-116页 |
| 2.2.3 Ⅰ型TPS基因的氨基酸序列分析 | 第116-119页 |
| 2.2.4 trans-IPPS-HH基因的氨基酸序列分析 | 第119-121页 |
| 2.2.5 Ⅰ型PKS基因的氨基酸序列分析 | 第121-126页 |
| 三 所选基因的载体构建及敲除 | 第126-139页 |
| 1 实验材料及方法 | 第126页 |
| 1.1 所用菌株与质粒 | 第126页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第126页 |
| 2 实验方法 | 第126-139页 |
| 2.1 引物设计 | 第126-132页 |
| 2.2 敲除载体构建 | 第132-133页 |
| 2.2.1 质粒详情 | 第132-133页 |
| 2.3 农杆菌转化 | 第133-139页 |
| 2.3.1 农杆菌转化替换原理 | 第133-138页 |
| 2.3.2 敲除质粒导入农杆菌 | 第138-139页 |
| 2.3.3 农杆菌介导转化 | 第139页 |
| 四 实验结果及分析 | 第139-147页 |
| 1. 构建敲除载体及突变菌株筛选验证 | 第139-147页 |
| 1.1 Ku70敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第139-140页 |
| 1.2 ERl0敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第140-141页 |
| 1.3 TPS5敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第141-142页 |
| 1.4 TPS8敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第142-143页 |
| 1.5 TPS15敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第143-144页 |
| 1.6 4个PKS敲除载体构建及转化子筛选验证 | 第144-147页 |
| 五 嗜热踝节菌突变菌株的构建探索 | 第147-155页 |
| 1. 以农杆菌转化的方法敲除嗜热踝节菌的条件探索 | 第147-153页 |
| 1.1 以Ku70,ER,三个TPS为目的基因进行的敲除条件探索 | 第147-149页 |
| 1.2 嗜热踝节菌对不同抗生素的抗性实验 | 第149-151页 |
| 1.3 以Nrs为抗性筛选标记进行的敲除条件探索 | 第151-153页 |
| 2 以电转化进行敲除的条件探索 | 第153-155页 |
| 六 小结与讨论 | 第155-156页 |
| 全文总结与展望 | 第156-159页 |
| 参考文献 | 第159-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
