| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 引言 | 第8-16页 |
| 1.1 EB病毒简介 | 第8-10页 |
| 1.1.1 EB病毒基因组成 | 第8-9页 |
| 1.1.2 EB病毒感染方式与相关疾病 | 第9-10页 |
| 1.2 LMP1简介 | 第10-15页 |
| 1.2.1 LMP1结构特征 | 第10-11页 |
| 1.2.2 LMP1蛋白的表达与调控 | 第11-12页 |
| 1.2.3 LMP1的相关互作蛋白及功能 | 第12页 |
| 1.2.4 LMP1与肿瘤坏死因子受体相关因子(TNF receptor associated factor, TRAF)家族蛋白相互作用及相关信号通路 | 第12-13页 |
| 1.2.5 LMP1与A20相关功能 | 第13页 |
| 1.2.6 LMP1与Ubc9相关的蛋白sumo化 | 第13-14页 |
| 1.2.7 LMP1与TRADD相关的抗细胞凋亡通路 | 第14页 |
| 1.2.8 LMP1的其他生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.3 研究意义 | 第15-16页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第16-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-21页 |
| 2.1.1 基因,菌种,细胞与质粒 | 第16-19页 |
| 2.1.2 试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 耗材及仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 聚合酶链式反应 | 第21-22页 |
| 2.2.2 重组方法进行基因重组 | 第22页 |
| 2.2.3 Quick change | 第22-23页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.2.5 Western-Blot | 第23-24页 |
| 2.2.6 大提质粒 | 第24页 |
| 2.2.7 黏粒提取 | 第24页 |
| 2.2.8 黏粒转染与病毒扩增 | 第24-26页 |
| 第3章 LMP1蛋白的表达、纯化与结晶 | 第26-38页 |
| 3.1 LMP1在昆虫细胞及哺乳动物细胞表达系统尝试表达 | 第26-30页 |
| 3.1.1 LMP1-His tag蛋白在昆虫细胞中的表达情况 | 第26-27页 |
| 3.1.2 HEK293f哺乳动物细胞转染方法优化 | 第27-29页 |
| 3.1.3 LMP1突变体及截短体在哺乳动物细胞中的表达情况 | 第29-30页 |
| 3.2 LMP1截短体在原核表达系统表达情况 | 第30-37页 |
| 3.2.1 LMP1-8 蛋白在E.coli BL21 菌株中的表达情况 | 第30-33页 |
| 3.2.2 LMP1-8的AUC检测结果为三聚体蛋白 | 第33-35页 |
| 3.2.3 LMP1的C-末端可溶区蛋白的结晶条件筛选 | 第35-36页 |
| 3.2.4 LMP1-C-末端可溶区蛋白的酶切 | 第36-37页 |
| 3.3 本章小结 | 第37-38页 |
| 第4章 LMP1的C-末端可溶区与TRAF3 复合物蛋白的表达、纯化及结晶 | 第38-60页 |
| 4.1 TRAF2-TRAF-domain的表达和纯化 | 第38页 |
| 4.2 TRAF2-310 蛋白与LMP1-8 相互作用弱 | 第38-39页 |
| 4.3 TRAF3-TRAF-domain的表达与纯化 | 第39-42页 |
| 4.3.1 TRAF3 两种截短体蛋白的克隆、表达和初步纯化 | 第39-40页 |
| 4.3.2 TRAF3-258-His蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.3 TRAF3-258的AUC检测 | 第41-42页 |
| 4.4 LMP1-8与TRAF3-258 复合物蛋白的表达、纯化 | 第42-47页 |
| 4.4.1 LMP-8-C-GST蛋白与TRAF3-258-His的共同纯化 | 第42-44页 |
| 4.4.2 LMP-8与TRAF3-258 共同转化后的表达与纯化 | 第44页 |
| 4.4.3 LMP1-8与TRAF3-258 分别表达后共同纯化 | 第44-46页 |
| 4.4.4 LMP1-8与TRAF3-258 复合物蛋白的AUC检测结果 | 第46-47页 |
| 4.5 LMP1与TRAF3-DN1(TRAF3 截短体)复合物的表达与纯化 | 第47-50页 |
| 4.5.1 TRAF3-DN1 的表达与纯化 | 第47-49页 |
| 4.5.2 LMP1-8与TRAF3-DN1 复合物的表达、纯化与鉴定 | 第49-50页 |
| 4.6 LMP1与TRAF3 结合的核心区域验证 | 第50-52页 |
| 4.7 LMP1-8 截短体(LMP1-8-D2)及其与TRAF3-258 复合物的表达、纯化与结晶 | 第52-60页 |
| 4.7.1 LMP1-8-D2 的表达与纯化 | 第52-54页 |
| 4.7.2 LMP1-8-D2 的结晶条件筛选 | 第54页 |
| 4.7.3 LMP1-8D2与TRAF3 形成的复合物的表达、纯化与结晶 | 第54-55页 |
| 4.7.4 LMP1-8-D2与TRAF3-258 复合物的结晶条件筛选 | 第55-60页 |
| 第5章 结果与讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 发表论文和参加科研情况的说明 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
