| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-16页 |
| ·Prohibitin 的结构特点 | 第9-10页 |
| ·Prohibitin 的细胞定位 | 第10-11页 |
| ·Prohibitin 的功能分析 | 第11-15页 |
| ·抑制细胞增殖 | 第11页 |
| ·调控细胞凋亡 | 第11-12页 |
| ·线粒体上的功能 | 第12-15页 |
| ·Prohibitin 与疾病 | 第15页 |
| ·展望 | 第15-16页 |
| 第2章 日本七鳃鳗Prohibitin 蛋白的基因克隆 | 第16-23页 |
| ·EST 数据分析 | 第16-17页 |
| ·材料和方法 | 第17-22页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·采用ficoll 密度梯度离心法进行白细胞的分离 | 第17页 |
| ·总RNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·反转录 | 第18-19页 |
| ·引物的设计 | 第19页 |
| ·cDNA3’末端快速扩增反应（3’RACE） | 第19-21页 |
| ·CDS 区克隆 | 第21-22页 |
| ·结论 | 第22-23页 |
| 第3章 生物信息学分析 | 第23-32页 |
| ·同源性搜索 | 第23-25页 |
| ·序列比对和保守结构域分析 | 第25-27页 |
| ·多序列比对 | 第25-26页 |
| ·保守结构域的分析 | 第26-27页 |
| ·系统进化分析 | 第27-28页 |
| ·Prohibiti111 蛋白的理化性质预测 | 第28-29页 |
| ·磷酸化位点分析 | 第28页 |
| ·糖基化位点分析 | 第28-29页 |
| ·氨基酸结构预测 | 第29-31页 |
| ·信号肽与跨膜区的预测 | 第29-30页 |
| ·二级与三级结构分析 | 第30-31页 |
| ·结论 | 第31-32页 |
| 第4章 Prohibitin1 蛋白原核中的表达及免疫印迹分析 | 第32-44页 |
| ·载体选择 | 第32-33页 |
| ·酶切位点的选择 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第33-36页 |
| ·目的片段的连接 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·提取质粒进行双酶切鉴定 | 第34-36页 |
| ·将包含有目的基因的质粒转化到表达菌 BL21 中,IPTG 诱导表达 | 第36-40页 |
| ·感受态的制备 | 第36-37页 |
| ·热激法转化 | 第37页 |
| ·IPTG 诱导表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定 | 第37-40页 |
| ·Western Blot 检测 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·药品的配制 | 第41页 |
| ·实验步骤 | 第41-42页 |
| ·Western Blot 结果 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 第5章 Prohibitin 蛋白在七鳃鳗组织中的分布及RT-PCR 结果 | 第44-51页 |
| ·利用半定量PCR 方法验证Prohibiti111 基因在七鳃鳗组织和细胞中分布及表达情况 | 第44-46页 |
| ·半定量PCR 反应条件 | 第45页 |
| ·半定量PCR 结果 | 第45-46页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·RT-PCR 方法检测PHA 刺激前后Prohibiti111 表达量的变化 | 第46-50页 |
| ·仪器和试剂 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·模板浓度选择 | 第47-49页 |
| ·检测七鳃鳗不同组织PHA 刺激前后Prohibitin 表达量的变化 | 第49-50页 |
| ·结论 | 第50-51页 |
| 第6章 主要结论 | 第51-52页 |
| ·结论 | 第51页 |
| ·创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
