| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 纳米抗体(Nanobody,Nb)研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 纳米抗体 | 第12页 |
| 1.1.2 纳米抗体的优势 | 第12-13页 |
| 1.1.3 纳米抗体的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 纳米抗体7D12 | 第14-15页 |
| 1.1.5 纳米抗体9G8 | 第15-16页 |
| 1.2 纳米抗体的表达系统 | 第16-18页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统 | 第16页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| 第二章 表达载体的构建 | 第18-28页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 设计合成及PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.2 纯化和电泳鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 质粒的酶切与连接 | 第22-23页 |
| 2.2.4 连接产物的转化及鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-28页 |
| 2.3.1 目的片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.2 质粒的酶切与连接 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| 第三章 纳米抗体在不同表达系统中表达及鉴定 | 第28-40页 |
| 3.1 实验仪器与试剂 | 第28-32页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第28页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第29-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 转化X33酵母及表达蛋白的纯化与鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2.2 转化大肠杆菌BL21及蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 3.2.3 变复性及样品纯化与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-39页 |
| 3.3.1 转化X33酵母及表达蛋白的纯化与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.2 转化大肠杆菌BL21及表达蛋白的纯化与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 纳米抗体的中试发酵放大生产及纯化鉴定 | 第40-54页 |
| 4.1 实验仪器与试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 7D12蛋白中试发酵 | 第41-43页 |
| 4.2.1.1 制备种子液 | 第41页 |
| 4.2.1.2 目的蛋白的中试发酵生产 | 第41-42页 |
| 4.2.1.3 诱导表达阶段 | 第42页 |
| 4.2.1.4 中试发酵的鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.1.5 发酵液初处理 | 第43页 |
| 4.2.2 7D12蛋白纯化 | 第43-45页 |
| 4.2.2.1 Ni-NTA填料装柱 | 第43-44页 |
| 4.2.2.2 Ni-NTA柱再生步骤 | 第44页 |
| 4.2.2.3 AKTA纯化步骤 | 第44-45页 |
| 4.2.2.4 纯化得到的蛋白样品处理 | 第45页 |
| 4.2.3 纯化样品检测 | 第45-49页 |
| 4.2.3.1 液相色谱检测 | 第45-46页 |
| 4.2.3.2 BCA蛋白定量 | 第46-47页 |
| 4.2.3.3 PPSQ-51A蛋白质测序 | 第47-48页 |
| 4.2.3.4 飞行时间质谱检测 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 中试发酵电泳鉴定结果 | 第49页 |
| 4.3.2 AKTA纯化电泳及液相检测结果 | 第49-50页 |
| 4.3.3 蛋白纯化液相色谱图 | 第50页 |
| 4.3.4 BCA定量检测结果 | 第50-51页 |
| 4.3.5 PPSQ-51A蛋白质测序结果 | 第51-52页 |
| 4.3.6 飞行质谱检测结果 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |