| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·L-苯丙氨酸的性质和应用 | 第13-14页 |
| ·L-Phe 的生产方法 | 第14-15页 |
| ·L-Phe 的合成途径和对关键酶的调节 | 第15-16页 |
| ·增强L-Phe 合成的代谢调控策略 | 第16-21页 |
| ·在解除反馈调节的基础上提高关键酶的表达 | 第16-18页 |
| ·降低副产物或分支代谢产物的合成 | 第18-20页 |
| ·提高前体物质的供应量 | 第20-21页 |
| ·发酵法生产L-Phe 的关键技术和策略 | 第21-23页 |
| ·温度控制 | 第21页 |
| ·葡萄糖和L-Tyr 流加 | 第21-22页 |
| ·在位提取技术 | 第22页 |
| ·非葡萄糖碳源的使用 | 第22页 |
| ·噬菌体污染的防治 | 第22-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-27页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-27页 |
| 第二章 发酵法生产L-Phe 的重组质粒的构建 | 第27-43页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·试剂和仪器 | 第27-29页 |
| ·NTG 诱变及抗β-2-噻吩丙氨酸突变菌株的筛选 | 第29页 |
| ·分子生物学操作 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的构建 | 第30页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第30-31页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第31页 |
| ·酶活性检测 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白分析 | 第32页 |
| ·质粒稳定性检测 | 第32页 |
| ·菌体浓度测定 | 第32-33页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第33页 |
| ·L-Phe 产量的测定 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-42页 |
| ·抗β-2-噻吩丙氨酸突变菌株的筛选和pheAfbr 基因的序列分析 | 第33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的酶切分析 | 第34-37页 |
| ·重组蛋白分析和酶活力检测 | 第37页 |
| ·酶活性检测 | 第37页 |
| ·反馈抑制分析 | 第37-39页 |
| ·重组大肠杆菌摇瓶发酵生产L-Phe 能力比较 | 第39-40页 |
| ·重组大肠杆菌在3-L 发酵罐上生产L-Phe 的能力比较 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 噬菌体BP-1 的分离、纯化及抗BP-1 大肠杆菌的筛选 | 第43-55页 |
| ·前言 | 第43页 |
| ·材料与方法 | 第43-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·噬菌体BP-1 的分离、纯化 | 第44-46页 |
| ·抗噬菌体、高产L-Phe 的重组大肠杆菌的筛选 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒的转化方法 | 第47页 |
| ·大肠杆菌培养方法 | 第47-48页 |
| ·烈性噬菌体的检测方法 | 第48页 |
| ·温和性大肠杆菌噬菌体的检测方法 | 第48页 |
| ·发酵参数检测方法 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-54页 |
| ·噬菌体性质检验 | 第48-49页 |
| ·噬菌体BP-1 的形态特征 | 第49-50页 |
| ·理化因素对噬菌体BP-1 活性的影响 | 第50页 |
| ·E. coli WSH-Z06 的NTG 诱变处理结果 | 第50-51页 |
| ·抗噬菌体BP-1 的重组E. coli 摇瓶发酵生产L-Phe | 第51-52页 |
| ·在添加噬菌体BP-1 条件下的摇瓶发酵 | 第52-53页 |
| ·在添加噬菌体BP-1 条件下的3-L 发酵罐发酵 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 葡萄糖流加方式对E. coli BR-42 (pAP-803) 发酵生产L-Phe 的影响 | 第55-63页 |
| ·前言 | 第55-56页 |
| ·材料与方法 | 第56-57页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·培养方法 | 第56-57页 |
| ·分析方法 | 第57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-62页 |
| ·诱导时间对 E. coli BR-42 (pAP-803) 生产L-Phe 的影响 | 第57-58页 |
| ·葡萄糖流加方式对E. coli BR-42 (pAP-803) 生产L-Phe 的影响 | 第58-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 丙酮酸激酶基因敲除对L-Phe 发酵的影响 | 第63-77页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-67页 |
| ·菌株与质粒 | 第63-64页 |
| ·试剂与仪器 | 第64页 |
| ·分子生物学操作 | 第64-66页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第66页 |
| ·分析方法 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-75页 |
| ·构建E. coli BR-42 的pykA 和pykF 单基因及双基因缺失菌株 | 第67-70页 |
| ·pAP-803 质粒转化丙酮酸激酶基因敲除大肠杆菌 | 第70-71页 |
| ·PYK 酶活测定 | 第71-72页 |
| ·pykF/pykA 单基因及双基因缺失对菌体生长的影响 | 第72页 |
| ·pykF 和/或pykA 单基因及双基因缺失对L-Phe 合成的影响 | 第72-75页 |
| ·本章小结 | 第75-77页 |
| 第六章 诱导温度对E. coli BR-42 ΔpykA (pAP-803) 发酵生产L-Phe 的影响 | 第77-85页 |
| ·前言 | 第77页 |
| ·材料与方法 | 第77-78页 |
| ·菌株 | 第77页 |
| ·试剂与仪器 | 第77-78页 |
| ·培养基 | 第78页 |
| ·培养方法 | 第78页 |
| ·分析方法 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-83页 |
| ·诱导温度对E. coli BR-42 ΔpykA (pAP-803) 菌体生长和L-Phe 生产的影响.. | 第78-79页 |
| ·不同诱导温度下E. coli BR-42 ΔpykA (pAP-803) 发酵动力学分析 | 第79-80页 |
| ·诱导温度下质粒稳定性分析 | 第80-81页 |
| ·分阶段温度控制策略的提出与实现 | 第81-82页 |
| ·诱导温度对DS、CM 和PDT 酶活的影响 | 第82-83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-87页 |
| 论文创新点 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第99页 |
