| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 一 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 锌(Zn)对动植物的影响 | 第10-11页 |
| 1.2 拟南芥Zn~(2+)转运蛋白的研究进展 | 第11页 |
| 1.3 作物Zn~(2+)转运蛋白的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 ZNE1的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 Zn~(2+)转运蛋白的研究意义 | 第14-16页 |
| 二 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要溶液与培养基的配制 | 第16-19页 |
| 2.1.4 引物列表 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 酵母表达载体与ZNE1基因重组质粒的构建 | 第20页 |
| 2.2.2 利用酵母互补实验验证拟南芥ZNE1的功能 | 第20-22页 |
| 2.2.2.1 ZHY3酵母感受态的制备(现用现制备) | 第20-21页 |
| 2.2.2.2 PEG介导的酵母转化 | 第21页 |
| 2.2.2.3 酵母质粒的提取 | 第21页 |
| 2.2.2.4 酵母转化子阳性克隆的筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.2.5 酵母功能互补实验 | 第22页 |
| 2.2.3 ZNE1基因的点突变 | 第22-25页 |
| 2.2.3.1 ZNE1基因磷酸化位点点突变质粒的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.3.2 通过PCR进行点突变 | 第24页 |
| 2.2.3.3 DMT酶消化及DMT感受态的转化 | 第24页 |
| 2.2.3.4 阳性转化子的鉴定及测序 | 第24-25页 |
| 2.2.4 酵母表达载体与含有点突变的ZNE1基因片段重组质粒的构建 | 第25页 |
| 2.2.5 利用酵母互补实验鉴定ZNE1的功能位点 | 第25-26页 |
| 2.2.5.1 酵母感受态的制备以及PEG介导的酵母转化 | 第25页 |
| 2.2.5.2 酵母质粒的提取 | 第25页 |
| 2.2.5.3 酵母转化子阳性克隆的筛选 | 第25-26页 |
| 2.2.5.4 酵母功能互补实验 | 第26页 |
| 2.2.6 对ZNE1非跨膜结构域分段短肽进行ITC200的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 ZNE1中Zn~(2+)结合位点的确定 | 第27-28页 |
| 三 实验结果 | 第28-41页 |
| 3.1 ZNE1酵母功能互补的结果 | 第28-29页 |
| 3.2 ZNE1预测的关键磷酸化位点点突变构建结果 | 第29页 |
| 3.3 含有点突变的ZNE1基因与pFL61融合表达载体的构建结果 | 第29-30页 |
| 3.4 酵母转化子阳性克隆的验证结果 | 第30-31页 |
| 3.5 ZNE1预测关键功能位点的酵母异源互补结果 | 第31-33页 |
| 3.6 对ZNE1非跨膜域分段短肽ITC200测定的结果 | 第33-36页 |
| 3.7 ZNE1中Zn~(2+)结合位点的预测及验证结果 | 第36-41页 |
| 3.7.1 ZNE1中Zn~(2+)结合位点的预测 | 第36-37页 |
| 3.7.2 ZNE1中Zn~(2+)结合位点的确定 | 第37-41页 |
| 3.7.2.1 被预测位点的点突变结果 | 第37-38页 |
| 3.7.2.2 构建融合酵母表达载体的验证结果 | 第38页 |
| 3.7.2.3 酵母转化子阳性克隆的验证结果 | 第38-39页 |
| 3.7.2.4 酵母异源功能互补实验结果 | 第39-41页 |
| 四 结论与讨论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 基金资助 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
