| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第1章 前沿 | 第14-28页 |
| 1.1 纤维素资源的利用 | 第14页 |
| 1.2 纤维素的结构 | 第14-16页 |
| 1.3 降解纤维素的微生物 | 第16-17页 |
| 1.3.1 降解纤维素的真菌 | 第16页 |
| 1.3.2 降解纤维素的细菌 | 第16-17页 |
| 1.4 纤维素的降解机制 | 第17-19页 |
| 1.4.1 游离纤维素酶协同降解机制 | 第17-18页 |
| 1.4.2 纤维素酶复合体的降解机制 | 第18页 |
| 1.4.3 第三种纤维素降解机制 | 第18-19页 |
| 1.5 滑动 | 第19-21页 |
| 1.6 新型的蛋白分泌系统por-secretion system(PorSS) | 第21-24页 |
| 1.7 哈氏噬纤维菌的研究背景 | 第24-26页 |
| 1.8 本课题的研究背景以及工作内容 | 第26-28页 |
| 1.8.1 本课题的立题依据 | 第26-27页 |
| 1.8.2 本文工作内容 | 第27-28页 |
| 第2章 CHU_0344蛋白分泌机制的研究 | 第28-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基与主要试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.4 突变株的构建 | 第31页 |
| 2.1.5 哈氏噬纤维菌中胞外分泌蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 2.1.6 哈氏噬纤维菌中膜蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.1.7 纤维素吸附膜蛋白的SDS-PAGE | 第32页 |
| 2.1.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE | 第32-33页 |
| 2.1.9 蛋白样品的Western Blot | 第33页 |
| 2.1.10 蛋白浓度的测定-Bradford法 | 第33-34页 |
| 2.1.11 菌体蛋白浓度的测定 | 第34页 |
| 2.1.12 差异蛋白条带的质谱鉴定 | 第34页 |
| 2.1.13 滤纸纤维上哈氏噬纤维菌的扫描电镜(SEM)观察 | 第34-35页 |
| 2.2 实验结果及讨论 | 第35-41页 |
| 2.2.1 胞外蛋白的SDS-PAGE结果 | 第35-36页 |
| 2.2.2 膜蛋白的提取以及纤维素吸附后的SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 2.2.3 胞外蛋白的western blot | 第37-39页 |
| 2.2.4 质谱鉴定结果 | 第39-40页 |
| 2.2.5 哈氏噬纤维菌的扫描电镜(SEM)观察 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-44页 |
| 第3章 CHU_0170以CHU_3237对CHU_0344蛋白分泌的影响 | 第44-60页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 菌种 | 第44页 |
| 3.1.2 培养基 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要试剂与仪器 | 第45页 |
| 3.1.4 哈氏噬纤维菌中胞外分泌蛋白的提取 | 第45页 |
| 3.1.5 哈氏噬纤维菌中膜蛋白的提取 | 第45-46页 |
| 3.1.6 纤维素吸附膜蛋白的SDS-PAGE | 第46页 |
| 3.1.7 哈氏噬纤维菌中外膜蛋白的提取 | 第46页 |
| 3.1.8 蛋白浓度测定-Bradford法 | 第46页 |
| 3.1.9 菌体蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| 3.1.10 胞外蛋白的Western Blot | 第46页 |
| 3.1.11 蛋白胶条的质谱鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.12 内切纤维素酶活的复性电泳 | 第47页 |
| 3.1.13 β-葡萄糖苷酶酶活的复性电泳 | 第47-48页 |
| 3.2 实验结果及分析 | 第48-58页 |
| 3.2.1 哈氏噬纤维菌中胞外蛋白的SDS-PAGE | 第48-49页 |
| 3.2.2 哈氏噬纤维菌膜蛋白以及纤维素吸附蛋白的SDS-PAGE | 第49-51页 |
| 3.2.3 哈氏噬纤维菌中外膜蛋白的SDS-PAGE | 第51-52页 |
| 3.2.4 胞外蛋白的western blot | 第52-54页 |
| 3.2.5 内切纤维素酶活(CMCase)和β-葡萄糖苷酶酶活(BG)的复性电泳 | 第54-57页 |
| 3.2.6 蛋白的质谱鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-60页 |
| 第4章 CHU_1796基因功能的研究 | 第60-76页 |
| 4.1 菌种 | 第60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-66页 |
| 4.2.1 培养基 | 第60-61页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第61页 |
| 4.2.3 CHU_1796蛋白生物信息学预测 | 第61-62页 |
| 4.2.4 哈氏噬纤维菌△1796突变株生长曲线的测定 | 第62页 |
| 4.2.5 △1796突变株软琼脂扩散 | 第62页 |
| 4.2.6 △1796突变株硬琼脂扩散 | 第62页 |
| 4.2.7 小培养观察哈氏噬纤维菌的菌落边缘扩散 | 第62页 |
| 4.2.8 △1796突变株滤纸降解实验 | 第62-63页 |
| 4.2.9 Δ1796突变株双层平板降解实验 | 第63页 |
| 4.2.10 玻片上的Tunnel实验 | 第63页 |
| 4.2.11 电镜观察菌体在滤纸纤维上的排列 | 第63-64页 |
| 4.2.12 菌体表面内切酶酶活的测定 | 第64页 |
| 4.2.13 菌体表面β-葡萄糖苷酶酶活的测定 | 第64-65页 |
| 4.2.14 突变株Δ1796外膜蛋白提取 | 第65页 |
| 4.2.15 外膜蛋白内切纤维素酶活的复性电泳 | 第65页 |
| 4.2.16 外膜蛋白β-葡萄糖苷酶酶活的复性电泳 | 第65页 |
| 4.2.17 菌体对结晶纤维素Avicel PH101的吸附实验 | 第65-66页 |
| 4.3 实验结果 | 第66-75页 |
| 4.3.1 CHU_1796蛋白生物信息学预测 | 第66-67页 |
| 4.3.2 哈氏噬纤维菌生长曲线的测定 | 第67页 |
| 4.3.3 哈氏噬纤维菌的软琼脂扩散实验 | 第67-68页 |
| 4.3.4 哈氏噬纤维菌单菌落硬琼脂扩散实验 | 第68-69页 |
| 4.3.5 小培养法观察哈氏噬纤维菌落边缘扩散 | 第69页 |
| 4.3.6 △1796突变株滤纸降解实验 | 第69-70页 |
| 4.3.7 双层平板上的降解实验 | 第70页 |
| 4.3.8 玻片上的Tunnel实验 | 第70-71页 |
| 4.3.9 电镜观察菌体在滤纸纤维上的排列 | 第71页 |
| 4.3.10 菌体表面内切酶酶活的测定 | 第71-72页 |
| 4.3.11 菌体表面β-葡萄糖苷酶酶活的测定 | 第72页 |
| 4.3.12 CMCase酶活的复性电泳 | 第72-73页 |
| 4.3.13 BG酶活复性电泳 | 第73页 |
| 4.3.14 菌体对结晶纤维素Avicel PH101的吸附实验 | 第73-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附表 | 第85页 |
