| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 纤维素 | 第14-15页 |
| 1.2 纤维素的生物降解 | 第15-16页 |
| 1.2.1 纤维素降解微生物 | 第15-16页 |
| 1.2.2 微生物的纤维素降解机制 | 第16页 |
| 1.3 瑞氏木霉的纤维素酶及转录调控因子 | 第16-22页 |
| 1.3.1 瑞氏木霉的纤维素酶 | 第16-18页 |
| 1.3.2 瑞氏木霉纤维素酶基因的转录调控因子 | 第18-22页 |
| 1.4 psi因子合成加氧酶Ppo | 第22-24页 |
| 1.5 酵母单杂交系统的原理与应用 | 第24-25页 |
| 1.6 真菌常用的报告基因 | 第25-26页 |
| 1.7 立题依据及研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 酵母单杂交分析cbh1启动子的点突变对转录因子Xyr1与其结合能力的影响 | 第28-43页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第28-36页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.2 菌种的保藏 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.4 培养基及培养条件 | 第30页 |
| 2.1.5 本章使用的引物及序列 | 第30-31页 |
| 2.1.6 引物设计与PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.1.7 琼脂糖凝胶电泳、质粒提取、PCR产物纯化及凝胶回收 | 第32页 |
| 2.1.8 粘性末端的连接反应 | 第32页 |
| 2.1.9 大肠杆菌感受态制备方法及大肠杆菌转化 | 第32-33页 |
| 2.1.10 重组质粒的筛选与鉴定 | 第33页 |
| 2.1.11 酵母单杂交系统的构建 | 第33-34页 |
| 2.1.12 酿酒酵母完整细胞转化 | 第34-35页 |
| 2.1.13 β-半乳糖苷酶酶活测定 | 第35-36页 |
| 2.2 结果与分析 | 第36-41页 |
| 2.2.1 cbh1启动子定点突变穿梭载体的构建 | 第36-39页 |
| 2.2.2 酵母转化菌株的构建及验证 | 第39-40页 |
| 2.2.3 β-半乳糖苷酶酶活的分析 | 第40-41页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 在瑞氏木霉体内利用uidA作为报告基因分析cbh1启动子点突变对其活性的影响 | 第43-67页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第43-55页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第43-44页 |
| 3.1.2 菌种的保藏 | 第44页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第44页 |
| 3.1.4 瑞氏木霉培养基及培养条件 | 第44-46页 |
| 3.1.5 本章使用的引物及序列 | 第46-47页 |
| 3.1.6 连接反应 | 第47-48页 |
| 3.1.7 cbh1启动子突变体表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.1.8 瑞氏木霉的遗传转化 | 第49-50页 |
| 3.1.9 瑞氏木霉基因组的提取 | 第50-51页 |
| 3.1.10 瑞氏木霉转化子的筛选 | 第51页 |
| 3.1.11 Southern印记杂交验证 | 第51-54页 |
| 3.1.12 GUS酶活的测定 | 第54-55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-65页 |
| 3.2.1 cbh1启动子点突变载体的构建 | 第55-59页 |
| 3.2.2 cbh1点突变启动子在瑞氏木霉中表达菌株的构建 | 第59-62页 |
| 3.2.3 瑞氏木霉GUS酶活分析 | 第62-65页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 瑞氏木霉psi因子合成加氧酶Ppo缺失菌株的构建及性质研究 | 第67-82页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第67-73页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第67-68页 |
| 4.1.2 培养基及培养条件、菌种保藏 | 第68页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第68页 |
| 4.1.4 本章使用的引物及序列 | 第68-69页 |
| 4.1.5 DelsGate系统及BP克隆反应 | 第69-71页 |
| 4.1.6 孢子萌发状态的显微镜观察 | 第71页 |
| 4.1.7 不同碳源平板生长实验 | 第71-72页 |
| 4.1.8 不同胁迫条件下的平板生长实验 | 第72页 |
| 4.1.9 pNPC水解酶活的测定 | 第72页 |
| 4.1.10 Western免疫印迹检测 | 第72-73页 |
| 4.2 结果与分析 | 第73-80页 |
| 4.2.1 ppo敲除载体的构建 | 第73-75页 |
| 4.2.2 瑞氏木霉ppoa、ppob敲除菌的构建及验证 | 第75-76页 |
| 4.2.3 ppo基因缺失对孢子萌发及菌丝状态的影响观察 | 第76页 |
| 4.2.4 缺失菌在不同碳源上的生长状况分析 | 第76-77页 |
| 4.2.5 缺失菌在不同胁迫条件下的的生长状况分析 | 第77-79页 |
| 4.2.6 ppo基因缺失对纤维素酶分泌的影响 | 第79-80页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第90页 |
