| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 药物代谢酶与药物代谢 | 第12页 |
| 1.2 羧酸酯酶 | 第12-16页 |
| 1.2.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 羧酸酯酶的分布 | 第13-14页 |
| 1.2.3 羧酸酯酶的一级结构 | 第14页 |
| 1.2.4 羧酸酯酶的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.5 羧酸酯酶的多态性及表达谱 | 第15-16页 |
| 1.2.6 羧酸酯酶的表达调控分子机制 | 第16页 |
| 1.3 猪肝羧酸酯酶PLE | 第16-22页 |
| 1.3.1 概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 猪肝羧酸酯酶PLE同工酶 | 第17-18页 |
| 1.3.3 PLE同工酶结构 | 第18-20页 |
| 1.3.4 PLE基因表达 | 第20-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-35页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 3.2.1 γ猪肝羧酸酯酶γ-PLE的克隆 | 第24-26页 |
| 3.2.2 γ猪肝羧酸酯酶原核表达质粒的构建 | 第26-29页 |
| 3.2.3 γ猪肝羧酸酯酶蛋白的表达与纯化 | 第29-31页 |
| 3.2.4 抗γ-PLE多克隆抗体的制备及纯化 | 第31-33页 |
| 3.2.5 Western blot检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第33页 |
| 3.2.6 Real-Time PCR检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第33-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-45页 |
| 4.1 PCR扩增结果 | 第35页 |
| 4.2 表达载体的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 4.3 诱导表达与纯化后分析 | 第36-39页 |
| 4.3.1 诱导表达条件的摸索 | 第36页 |
| 4.3.2 表达蛋白可溶性检测 | 第36-37页 |
| 4.3.3 重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 4.3.4 重组蛋白的免疫性检测 | 第38页 |
| 4.3.5 重组蛋白的酶活性染色 | 第38-39页 |
| 4.4 兔抗pET32a-γPLE多抗的鉴定 | 第39-41页 |
| 4.4.1 间接ELISA测定抗体效价 | 第39-40页 |
| 4.4.2 γ-PLE多抗IgG的纯化 | 第40-41页 |
| 4.4.3 多抗的Western blot免疫反应性检测 | 第41页 |
| 4.5 Western blot检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第41-42页 |
| 4.6 Real-Time PCR检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第42-45页 |
| 4.6.1 Real-Time PCR扩增 | 第42-43页 |
| 4.6.2 Real-Time PCR扩增曲线 | 第43-44页 |
| 4.6.3 Real-Time PCR数据分析 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-48页 |
| 5.1 γ-PLE基因的PCR引物设计 | 第45页 |
| 5.2 原核表达载体的选择 | 第45-46页 |
| 5.3 菌种的选择 | 第46页 |
| 5.4 γ-PLE蛋白的酶活性染色 | 第46页 |
| 5.5 Western blot法检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第46-47页 |
| 5.6 Real-Time PCR法检测成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第47页 |
| 5.7 成年猪、仔猪γ-PLE的表达差异 | 第47页 |
| 5.8 本研究不足之处 | 第47-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录1:γ-猪肝羧酸酯酶基因片段序列(GenBank登录号:X63323) | 第55-56页 |
| 附录2:γ-猪肝羧酸酯酶基因片段序列比对结果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
