| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第13-14页 |
| 1.2 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.2.1 胎盘简介 | 第14页 |
| 1.2.2 印记基因与胎盘发育 | 第14-19页 |
| 1.2.2.1 印记基因概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 印记基因的擦除与重建 | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 印记基因的遗传分子机制 | 第16-18页 |
| 1.2.2.4 印记基因与癌症 | 第18-19页 |
| 1.2.2.5 印记基因对胎盘发育的影响 | 第19页 |
| 1.2.3 基因甲基化研究方法 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 全基因组甲基化扫描 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 单基因甲基化分析方法 | 第20页 |
| 1.2.3.3 焦磷酸测序原理 | 第20-21页 |
| 1.2.4 印记基因NNAT的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2.4.1 NNAT基因的结构 | 第21-22页 |
| 1.2.4.2 NNAT的功能研究 | 第22-24页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-44页 |
| 2.1 材料 | 第26-31页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第26页 |
| 2.1.2 实验菌株和载体 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂及其配置 | 第26-29页 |
| 2.1.3.1 主要试剂、耗材 | 第26-28页 |
| 2.1.3.2 主要试剂的配置 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.1.5 生物信息分析所需网站及数据库 | 第30-31页 |
| 2.1.5.1 分析所需软件 | 第30页 |
| 2.1.5.2 主要数据库及在线资源 | 第30-31页 |
| 2.2 研究的总体思路及研究方案图示 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.3.1 组织DNA提取方法 | 第32页 |
| 2.3.2 组织RNA提取方法 | 第32页 |
| 2.3.3 细胞提取RNA方法 | 第32-33页 |
| 2.3.4 RNA反转录 | 第33页 |
| 2.3.5 焦磷酸测序实验方法 | 第33-38页 |
| 2.3.5.1 重亚硫酸盐处理基因组DNA方法 | 第33-35页 |
| 2.3.5.2 PCR扩增NNAT基因启动子甲基岛 | 第35-37页 |
| 2.3.5.3 样品的预处理 | 第37-38页 |
| 2.3.5.4 焦磷酸测序检测NNAT基因启动子甲基化程度 | 第38页 |
| 2.3.6 pcDNA3.1-NNAT载体的构建 | 第38-41页 |
| 2.3.6.1 NNAT基因编码区扩增 | 第38-39页 |
| 2.3.6.2 DNA产物回收 | 第39页 |
| 2.3.6.3 目的片段与载体的连接 | 第39-40页 |
| 2.3.6.4 连接产物转化、测序 | 第40页 |
| 2.3.6.5 阳性克隆去内毒素质粒的提取 | 第40-41页 |
| 2.3.7 细胞培养及载体转染 | 第41页 |
| 2.3.8 荧光定量Real-Time PCR | 第41-44页 |
| 2.3.8.1 引物设计合成 | 第42-43页 |
| 2.3.8.2 荧光定量Real-Time PCR方法 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-61页 |
| 3.1 NNAT基因的生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 3.2 NNAT基因启动子甲基化与表达水平 | 第45-56页 |
| 3.2.1 甲基岛检测 | 第45-46页 |
| 3.2.2 BT、NT、IVF猪中NNAT基因启动子甲基化与表达分析结果 | 第46-52页 |
| 3.2.2.1 肝脏组织中NNAT基因启动子甲基化与表达 | 第46-50页 |
| 3.2.2.2 肌肉组织中NNAT基因启动子甲基化与表达 | 第50-52页 |
| 3.2.3 大白猪与二花脸猪中NNAT基因启动子甲基化与表达分析结果 | 第52-56页 |
| 3.2.3.1 大白猪与二花脸猪NNAT基因启动子甲基化 | 第53-55页 |
| 3.2.3.2 大白猪与二花脸猪NNAT基因表达差异 | 第55-56页 |
| 3.3 大白猪与二花脸猪NNAT基因与GLUT及其通路基因的关系 | 第56-59页 |
| 3.4 细胞水平上NNAT基因对GLUT基因表达的调控 | 第59-61页 |
| 3.4.1 pcDNA3.1-NNAT载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.4.2 NNAT基因的高表达对GLUT基因的调控 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 实验结果的讨论 | 第61-64页 |
| 4.1.1 NNAT基因生物信息学分析的结果讨论 | 第61页 |
| 4.1.2 印记基因NNAT不同表达调控机制的结果讨论 | 第61-63页 |
| 4.1.2.1 BT、NT、IVF猪NNAT基因表达受启动子甲基化调控 | 第61-62页 |
| 4.1.2.2 大白猪与二花脸中NNAT基因表达不受启动子甲基化调控 | 第62页 |
| 4.1.2.3 总结印记基因NNAT表达调控机制 | 第62-63页 |
| 4.1.3 大白猪和二花脸猪胎盘中NNAT基因与糖转运通路相关基因的调控关系及其生物学功能 | 第63-64页 |
| 4.1.4 细胞水平NNAT基因对GLUT基因表达具有一定的调控作用 | 第64页 |
| 4.2 实验方法的讨论 | 第64-67页 |
| 4.2.1 焦磷酸测序方法讨论 | 第64-66页 |
| 4.2.2 定量方法的讨论 | 第66页 |
| 4.2.3 细胞转染方法的讨论 | 第66-67页 |
| 5 小结 | 第67-69页 |
| 5.1 本研究的主要结果与结论 | 第67页 |
| 5.2 本研究的创新点与特色 | 第67-68页 |
| 5.3 本研究的不足之处与下一步工作的建议 | 第68-69页 |
| 5.3.1 本研究的不足之处及其弥补 | 第68页 |
| 5.3.2 进一步深入工作的建议 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
