| 致谢 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 术语缩写表 | 第21-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-36页 |
| 1.1 植物碳水化合物代谢 | 第23-24页 |
| 1.2 植物碳代谢的调控与糖信号 | 第24-28页 |
| 1.3 植物碳水化合物质体转运蛋白 | 第28-32页 |
| 1.4 植物启动子研究常用方法与工具 | 第32-34页 |
| 1.5 本研究选题依据及意义 | 第34-36页 |
| 第二章 ATPPT1基因调控叶和根表型的机理研究 | 第36-79页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 2.1 材料和方法 | 第37-48页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 2.1.1.2 菌种和质粒 | 第37-38页 |
| 2.1.1.3 试剂 | 第38页 |
| 2.1.2 拟南芥和烟草的培养 | 第38-39页 |
| 2.1.3 拟南芥基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 2.1.4 拟南芥RNA的提取 | 第39页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第39页 |
| 2.1.6 基因(片段)和启动子的克隆 | 第39-41页 |
| 2.1.6.1 AtPPT1基因及其启动子的克隆 | 第39-40页 |
| 2.1.6.2 AtPPT2基因及其启动子的克隆 | 第40页 |
| 2.1.6.3 AtSuc2基因启动子的克隆 | 第40-41页 |
| 2.1.6.4 AtARSK1基因启动子的克隆 | 第41页 |
| 2.1.7 序列分析 | 第41页 |
| 2.1.8 植物表达载体的构建 | 第41-46页 |
| 2.1.8.1 启动子融合GUS/eGFP报告基因表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.1.8.2 AtPPT1基因不同启动子驱动的过表达和RNAi载体的构建 | 第42-44页 |
| 2.1.8.3 AtPPT1、AtPPT2融合eGFP报告基因表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.1.8.4 AtPPT1基因信号肽PTS融合eGFP报告基因表达载体的构建 | 第45页 |
| 2.1.8.5 PTS、AtPPT2、eGFP报告基因融合表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.1.9 农杆菌介导烟草瞬时表达 | 第46页 |
| 2.1.10 拟南芥转基因及其检测 | 第46页 |
| 2.1.11 不同拟南芥材料的杂交 | 第46页 |
| 2.1.12 GUS报告基因的组织化学染色 | 第46-47页 |
| 2.1.13 基因表达检测 | 第47页 |
| 2.1.14 叶绿素含量的测定 | 第47页 |
| 2.1.15 根长测定与根尖显微观察 | 第47-48页 |
| 2.1.16 cue1突变体代谢分析 | 第48页 |
| 2.2 结果与分析 | 第48-74页 |
| 2.2.1 基因(DNA片段)和启动子的克隆 | 第48-51页 |
| 2.2.3 AtPPT1基因RNAi载体的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.4 启动子报告基因融合表达载体的鉴定 | 第52-53页 |
| 2.2.5 AtPPT1基因功能缺失导致拟南芥主根变短 | 第53-56页 |
| 2.2.6 叶特异调控AtPPT1表达水平控制叶表型 | 第56-58页 |
| 2.2.7 根特异调控AtPPT1表达水平控制根表型 | 第58-60页 |
| 2.2.8 AtPPT1基因突变体主根表型的分子机制 | 第60-61页 |
| 2.2.9 AtPPT1基因调控根生长与植物激素的关系 | 第61-63页 |
| 2.2.10 AtPPT1基因表达水平与AtPPT2基因表达的关系 | 第63-64页 |
| 2.2.11 AtPPT1和AtPPT2编码蛋白的亚细胞定位 | 第64-67页 |
| 2.2.12 AtPPT1基因信号肽PTS在PPT转运中的作用 | 第67-69页 |
| 2.2.13 AtPPT1基因对拟南芥代谢的调控 | 第69-74页 |
| 2.3 讨论 | 第74-79页 |
| 2.3.1 AtPPT1基因参与调控拟南芥根的发育过程 | 第74-75页 |
| 2.3.2 AtPPT1基因独立调控拟南芥根部和叶的发育 | 第75-76页 |
| 2.3.3 质体定位信号肽在AtPPT1基因功能中的重要作用 | 第76-77页 |
| 2.3.4 AtPPT1基因可能介导植物激素调控根发育 | 第77页 |
| 2.3.5 AtPPT1基因在拟南芥根和叶的代谢中具有不同的作用 | 第77-79页 |
| 第三章 水稻PPT1基因抑制表达的初步研究 | 第79-99页 |
| 前言 | 第79页 |
| 3.1 材料和方法 | 第79-84页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第80页 |
| 3.1.2 水稻基因组DNA和总RNA的提取 | 第80页 |
| 3.1.3 序列分析 | 第80页 |
| 3.1.4 PPT1基因水稻同源基因OsPPT1h的克隆 | 第80-81页 |
| 3.1.4.1 同源序列比对 | 第80页 |
| 3.1.4.2 cDNA的克隆 | 第80-81页 |
| 3.1.5 植物表达载体的构建 | 第81-83页 |
| 3.1.5.1 OsPPT1h过表达植物载体的构建 | 第81-82页 |
| 3.1.5.2 OsPPT1h RNAi植物载体的构建 | 第82-83页 |
| 3.1.5.3 OsPPT1h亚细胞定位表达载体的构建 | 第83页 |
| 3.1.6 OsPPT1h编码蛋白亚细胞定位 | 第83页 |
| 3.1.7 OsPPT1h功能互补实验 | 第83-84页 |
| 3.1.8 农杆菌介导法转化水稻 | 第84页 |
| 3.1.9 转基因水稻的PCR验证和表达分析 | 第84页 |
| 3.2 结果与分析 | 第84-96页 |
| 3.2.1 OsPPT1h cDNA克隆的鉴定及序列分析 | 第84-88页 |
| 3.2.2 OsPPT1h表达载体的鉴定 | 第88-89页 |
| 3.2.3 OsPPT1h编码蛋白的亚细胞定位 | 第89-91页 |
| 3.2.4 OsPPT1h在拟南芥中的表达 | 第91-92页 |
| 3.2.5 OsPPT1h转基因植株的获得 | 第92-94页 |
| 3.2.6 OsPPT1h RNAi抑制表达的水稻表型分析 | 第94-96页 |
| 3.3 讨论 | 第96-99页 |
| 3.3.1 单子叶植物中PPT1基因序列上的变异 | 第96-97页 |
| 3.3.2 水稻OsYPT1h基因功能的保守性与变异 | 第97-99页 |
| 第四章 叶脉特异表达增强子的克隆及运用 | 第99-119页 |
| 前言 | 第99-100页 |
| 4.1 材料和方法 | 第100-105页 |
| 4.1.1 菌株 | 第100页 |
| 4.1.2 叶脉特异表达启动子AmidP的克隆 | 第100-101页 |
| 4.1.3 序列分析 | 第101页 |
| 4.1.4 AmidP植物表达载体的构建 | 第101-103页 |
| 4.1.4.1 AmidP植物表达载体的构建 | 第101-102页 |
| 4.1.4.2 不同长度AmidP 5’端缺失载体的构建 | 第102-103页 |
| 4.1.4.3 AmidP及不同长度缺失载体的PCR鉴定 | 第103页 |
| 4.1.5 融合CaMV35S最小启动子GUS基因载体的构建 | 第103-104页 |
| 4.1.6 GUS报告基因的检测与测定 | 第104-105页 |
| 4.1.6.1 GUS组织化学染色 | 第104页 |
| 4.1.6.2 GUS活性的荧光测定 | 第104-105页 |
| 4.1.7 VVE的应用 | 第105页 |
| 4.2 结果与分析 | 第105-116页 |
| 4.2.1 AmidP的克隆与序列分析 | 第105-108页 |
| 4.2.2 AmidP是源叶叶脉特异表达的启动子 | 第108-109页 |
| 4.2.3 AmidP 5’端缺失载体的鉴定与表达 | 第109-111页 |
| 4.2.4 VVE是叶脉特异表达的增强子 | 第111-112页 |
| 4.2.5 VVE关键顺式作用元件的分离 | 第112-114页 |
| 4.2.6 VVE驱动AtPPT1基因表达能回复cue1突变叶表型 | 第114-116页 |
| 4.3 讨论 | 第116-119页 |
| 4.3.1 AmidP可能参与库源转换中代谢物的再利用 | 第116-117页 |
| 4.3.2 叶脉特异表达关键顺式作用元件的保守性 | 第117-118页 |
| 4.3.3 VVE可满足基因叶脉特异表达研究的需求 | 第118-119页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第119-122页 |
| 参考文献 | 第122-131页 |
