| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文名称缩写 | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-42页 |
| 1.1 雌性哺乳动物的生殖发育 | 第14-18页 |
| 1.1.1 PGC 的特化与迁移 | 第14-16页 |
| 1.1.2 PGC 的分化与卵子发生 | 第16-17页 |
| 1.1.3 卵泡发育 | 第17-18页 |
| 1.2 干细胞研究 | 第18-33页 |
| 1.2.1 干细胞的定义、种类与来源 | 第18-19页 |
| 1.2.2 干细胞的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.3 ES 细胞与精原干细胞 | 第21-22页 |
| 1.2.4 干细胞的特征 | 第22-27页 |
| 1.2.5 干细胞的分离与纯化 | 第27-28页 |
| 1.2.6 白消安、环磷酰胺与不孕模型 | 第28-29页 |
| 1.2.7 雌性生殖干细胞的研究 | 第29-30页 |
| 1.2.8 体外诱导干细胞分化为生殖细胞 | 第30-33页 |
| 1.3 Fat-1 基因与转基因大鼠 | 第33-42页 |
| 1.3.1 脂肪酸简介 | 第33-34页 |
| 1.3.2 n-3 PUFAs 和 n-6 PUFAs 与人体健康 | 第34-38页 |
| 1.3.3 fat-1 基因 | 第38-40页 |
| 1.3.4 制备 fat-1 转基因大鼠 | 第40-42页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第42-67页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第42页 |
| 2.2 实验动物 | 第42页 |
| 2.3 SD 大鼠雌性生殖干细胞的定位 | 第42-46页 |
| 2.3.1 SD 大鼠卵巢的石蜡切片 | 第42-43页 |
| 2.3.2 DDX4 与 Fragilis 在 SD 大鼠卵巢中的表达比较 | 第43-44页 |
| 2.3.3 BrdU/DDX4 与 BrdU/Fragilis 在 SD 大鼠卵巢中的免疫荧光双标记 | 第44-46页 |
| 2.4 SD 大鼠雌性生殖干细胞滋养层 STO 细胞的培养与处理 | 第46-47页 |
| 2.4.1 滋养层细胞 STO 的解冻与培养 | 第46页 |
| 2.4.2 滋养层细胞的制备 | 第46-47页 |
| 2.5 SD 大鼠雌性生殖干细胞体外分离纯化 | 第47-48页 |
| 2.5.1 两步酶解法体外分离 SD 大鼠雌性生殖干细胞 | 第47页 |
| 2.5.2 SD 大鼠雌性生殖干细胞纯化（免疫磁珠法） | 第47-48页 |
| 2.6 SD 大鼠雌性生殖干细胞体外建系培养 | 第48-49页 |
| 2.6.1 培养换液 | 第48页 |
| 2.6.2 细胞传代 | 第48页 |
| 2.6.3 细胞冻存 | 第48-49页 |
| 2.6.4 细胞解冻 | 第49页 |
| 2.7 细胞的免疫荧光化学 | 第49-50页 |
| 2.7.1 Fragilis 磁珠纯化细胞 DDX4 的表达 | 第49页 |
| 2.7.2 细胞的 DDX4/BrdU 免疫荧光双标记实验 | 第49-50页 |
| 2.8 SD 大鼠雌性生殖干细胞系的 RT-PCR 检测 | 第50-53页 |
| 2.8.1 5 日龄大鼠卵巢组织和细胞的 mRNA 提取 | 第50-51页 |
| 2.8.2 mRNA 反转录为 cDNA | 第51页 |
| 2.8.3 PCR 检测 | 第51-53页 |
| 2.8.4 琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 结果 | 第53页 |
| 2.9 雌性大鼠生殖干细胞端粒酶活性检测 | 第53-54页 |
| 2.10 细胞系碱性磷酸酶活性检测 | 第54页 |
| 2.11 细胞核型检测 | 第54-55页 |
| 2.12 细胞系 OCT4 的表达检测 | 第55页 |
| 2.13 细胞系甲基化水平检测 | 第55-58页 |
| 2.13.1 细胞 DNA 的提取 | 第55页 |
| 2.13.2 DNA 的修饰处理 | 第55-56页 |
| 2.13.3 PCR 扩增 | 第56-57页 |
| 2.13.4 DNA 胶回收 | 第57页 |
| 2.13.5 酶切 DNA | 第57-58页 |
| 2.13.6 酶切后电泳 | 第58页 |
| 2.14 SD 大鼠雌性生殖干细胞体内移植实验 | 第58-63页 |
| 2.14.1 不育 SD 雌性大鼠模型的构建 | 第58页 |
| 2.14.2 脂质体介导的 GFP/fat-1 转染大鼠雌性生殖干细胞 | 第58-59页 |
| 2.14.3 细胞移植 | 第59-63页 |
| 2.15 fat-1 转基因大鼠基因功能检测 | 第63-64页 |
| 2.15.1 fat-1 转基因大鼠的脂质检测 | 第63-64页 |
| 2.15.2 18-26 月龄老年 fat-1 转基因大鼠与老年野生型 SD 大鼠比较 | 第64页 |
| 2.16 大鼠雌性生殖干细胞的体外分化研究 | 第64-65页 |
| 2.17 长期培养的雌性生殖干细胞免疫荧光化学检测 | 第65-66页 |
| 2.18 长期培养的雌性生殖干细胞 RT-PCR 检测 | 第66-67页 |
| 第三章 实验结果 | 第67-96页 |
| 3.1 体内对 SD 大鼠雌性生殖干细胞的定位 | 第67-70页 |
| 3.2 SD 大鼠雌性生殖干细胞的分离、培养以及建系 | 第70-74页 |
| 3.2.1 细胞的分离纯化 | 第70-72页 |
| 3.2.2 细胞在体外的培养 | 第72-74页 |
| 3.3 SD 大鼠雌性生殖干细胞系的鉴定 | 第74-81页 |
| 3.3.1 标志基因表达的检测 | 第75-77页 |
| 3.3.2 碱性磷酸酶活性检测 | 第77-78页 |
| 3.3.3 端粒酶活性检测 | 第78-79页 |
| 3.3.4 细胞核型检测 | 第79-80页 |
| 3.3.5 甲基化状态分析 | 第80-81页 |
| 3.4 SD 大鼠雌性生殖干细胞的体外分化 | 第81-84页 |
| 3.5 大鼠雌性生殖干细胞在体内的分化 | 第84-90页 |
| 3.5.1 SD 不孕大鼠 | 第84-85页 |
| 3.5.2 手术移植并检测手术后大鼠卵巢恢复情况 | 第85-86页 |
| 3.5.3 细胞移植后产生子代 | 第86-87页 |
| 3.5.4 子代鉴定 | 第87-90页 |
| 3.6 构建 fat-1 转基因大鼠 | 第90-93页 |
| 3.6.1 PCR 检测 fat-1 转基因大鼠 | 第91页 |
| 3.6.2 Southern 杂交检测 fat-1 转基因大鼠 | 第91-92页 |
| 3.6.3 阳性小鼠组织的 fat-1 基因的 mRNA 分析 | 第92-93页 |
| 3.7 fat-1 转基因大鼠的功能研究 | 第93-96页 |
| 第四章 讨论 | 第96-103页 |
| 4.1 具有增殖活性的生殖细胞在大鼠卵巢中的定位 | 第96-97页 |
| 4.2 双酶法与 Fragilis 磁珠分选结合分离纯化细胞以及细胞培养 | 第97-99页 |
| 4.3 培养细胞的特征分析 | 第99-100页 |
| 4.4 大鼠雌性生殖干细胞在体外的分化 | 第100-101页 |
| 4.5 雌性生殖干细胞应用 | 第101-103页 |
| 第五章 全文总结 | 第103-105页 |
| 5.1 主要结论 | 第103-104页 |
| 5.2 研究展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 附录Ⅰ实验仪器 | 第119-120页 |
| 附录Ⅱ 材料与试剂 | 第120-123页 |
| 附录Ⅲ 实验试剂配制方法 | 第123-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第130-131页 |
| 攻读博士学位期间参与的国家项目 | 第131-133页 |
