| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 花特异启动子 | 第14-15页 |
| 1.2 嵌合启动子 | 第15-16页 |
| 1.3 植物体细胞胚发生 | 第16-18页 |
| 1.3.1 体细胞胚发生的概念 | 第16页 |
| 1.3.2 体细胞胚发生的特点 | 第16-17页 |
| 1.3.3 影响体细胞胚诱导的关键因素 | 第17-18页 |
| 1.4 百合体细胞胚发生的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 百合转基因的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.6 ACO 基因研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7 RNA 干扰技术的研究及其在植物中的应用现状 | 第22-23页 |
| 1.8 目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.9 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 花特异的嵌合启动子功能分析 | 第25-37页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 转基因植株培养及移栽 | 第26页 |
| 2.2.2 组织化学染色 | 第26-27页 |
| 2.2.3 GUS 蛋白荧光测定 | 第27页 |
| 2.2.4 RNA 提取及实时定量 PCR | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.3.1 四个花特异的嵌合启动子 DNA 序列分析 | 第28-29页 |
| 2.3.2 组织化学分析四个嵌合启动子的 GUS 活性 | 第29-31页 |
| 2.3.3 四个嵌合启动子的 GUS 酶活分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 RT-PCR 分析四个嵌合启动子驱动的 GUS 基因转录 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 2.5 结论 | 第36-37页 |
| 第三章 35S 启动子及增强花特异启动子驱动 ACO RNAi 载体构建 | 第37-51页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第37页 |
| 3.1.3 酶及主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 百合花瓣总 RNA 提取 | 第38页 |
| 3.2.2 cDNA 的合成 | 第38页 |
| 3.2.3 ACO 基因正反义片段扩增的引物设计 | 第38页 |
| 3.2.4 ACO 基因正、反义片段的克隆 | 第38页 |
| 3.2.5 PCR 扩增产物的回收 | 第38页 |
| 3.2.6 回收产物与 pGEM-T Easy Vector 连接 | 第38-39页 |
| 3.2.7 连接产物转化感受态细胞 | 第39页 |
| 3.2.8 菌液 PCR 鉴定重组克隆载体 | 第39页 |
| 3.2.9 重组质粒的提取 | 第39页 |
| 3.2.10 重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| 3.2.11 35S 启动子驱动的 ACO RNAi 表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.12 增强花特异启动子驱动的 ACO RNAi 表达载体的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| 3.2.13 序列分析 | 第42页 |
| 3.2.14 农杆菌感受态细胞电击转化质粒 pCAMBIA1301-35S-RNAi-ACO | 第42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.3.1 百合 ACO 基因正反义片段的 PCR 扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.2 百合 ACO 正、反义片段的克隆及重组子的鉴定 | 第43页 |
| 3.3.3 百合 ACO 基因正反义片段序列的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 35S 启动子驱动的 ACO RNAi 表达载体的构建及质粒鉴定 | 第44-46页 |
| 3.3.5 增强花特异启动子驱动的 ACO RNAi 表达载体的构建及质粒鉴定 | 第46-48页 |
| 3.3.6 质粒 pCAMBIA1301-35S-RNAi-ACO 转化农杆菌及鉴定 | 第48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 结论 | 第49-51页 |
| 第四章 百合体细胞胚再生体系的建立 | 第51-61页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 百合胚性愈伤组织的诱导 | 第52页 |
| 4.2.2 百合胚性愈伤组织的保持及增殖 | 第52-53页 |
| 4.2.3 百合体胚萌发及植株再生 | 第53页 |
| 4.2.4 百合体细胞胚的形态学观察(光学及扫描电镜观察) | 第53页 |
| 4.2.5 百合再生植株的驯化与移栽 | 第53页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-59页 |
| 4.3.1 影响百合花器官胚性愈伤组织诱导的因素 | 第53-55页 |
| 4.3.2 影响百合花器官胚性愈伤组织增殖的因素 | 第55-56页 |
| 4.3.3 影响百合体胚萌发及植株再生的因素 | 第56-58页 |
| 4.3.4 组织学及扫描电镜观察 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 4.5 结论 | 第60-61页 |
| 第五章 百合 ACO RNAi 遗传转化研究 | 第61-74页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第61页 |
| 5.1.2 菌株和载体 | 第61页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第61页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第61-62页 |
| 5.2 方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 百合胚性愈伤的潮霉素浓度筛选 | 第62页 |
| 5.2.2 农杆菌介导法转化 ACO RNAi 载体 | 第62页 |
| 5.2.3 基因枪法转化 ACO RNAi 载体 | 第62-63页 |
| 5.2.4 PCR 检测 | 第63-64页 |
| 5.2.5 Southern blot 分析 | 第64页 |
| 5.2.6 组织化学染色 | 第64页 |
| 5.2.7 数据分析 | 第64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-71页 |
| 5.3.1 百合胚性愈伤的潮霉素选择压力的确定 | 第64-65页 |
| 5.3.2 农杆菌介导的百合胚性愈伤组织的转化 | 第65-66页 |
| 5.3.3 基因枪法的百合胚性愈伤组织转化 | 第66-67页 |
| 5.3.4 PCR 检测 | 第67-68页 |
| 5.3.5 Southern blot 检测 | 第68-69页 |
| 5.3.6 百合转化材料及转基因植株的组织化学检测 | 第69-71页 |
| 5.4 讨论 | 第71-73页 |
| 5.5 结论 | 第73-74页 |
| 第六章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-91页 |
| 缩略词 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |
