| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 细小病毒形态及理化特征 | 第12-13页 |
| 1.2 细小病毒基因组组成及蛋白功能概述 | 第13-16页 |
| 1.2.1 细小病毒基因组组成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 细小病毒非结构蛋白及其功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 细小病毒结构蛋白及其功能 | 第15-16页 |
| 1.3 细小病毒滚动式复制 | 第16-17页 |
| 1.4 细小病毒受体转铁蛋白 | 第17页 |
| 1.5 FPV、MEV和CPV的进化概述 | 第17-19页 |
| 1.6 病毒反向遗传学研究概况 | 第19-22页 |
| 1.6.1 反向遗传学原理 | 第19-20页 |
| 1.6.2 反向遗传学应用 | 第20页 |
| 1.6.3 细小病毒反向遗传系统构建 | 第20-22页 |
| 1.7 研究内容及目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 FPV HH-1/86株理化性质鉴定及全基因组测序 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 2.1.1 毒株 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 细小病毒电镜观察 | 第23-24页 |
| 2.1.5 病毒理化特性试验 | 第24页 |
| 2.1.6 细小病毒最适pH范围试验 | 第24页 |
| 2.1.7 细小病毒基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.1.8 病毒中间片段扩增 | 第24-25页 |
| 2.1.9 PCR产物末端加碱基A | 第25-26页 |
| 2.1.10 连接pMD19-T载体 | 第26页 |
| 2.1.11 连接产物转化 | 第26页 |
| 2.1.12 病毒末端ITR扩增及连接pMD19-T载体测序 | 第26页 |
| 2.2 结果 | 第26-31页 |
| 2.2.1 细小病毒形态学鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.2 病毒理化性质试验结果 | 第27页 |
| 2.2.3 病毒最适pH范围试验结果 | 第27-28页 |
| 2.2.4 病毒基因组PCR扩增电泳结果 | 第28-29页 |
| 2.2.5 NS1和VP2氨基酸序列进化分析 | 第29-30页 |
| 2.2.6 HH-1/86株 3’末端Y和 5’末端U功能分析 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 FPV全长质粒pFPV构建 | 第33-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.3 中间片段overlap PCR | 第33-34页 |
| 3.1.4 PCR产物胶回收 | 第34-35页 |
| 3.1.5 定点突变 | 第35页 |
| 3.1.6 Dpn I产物转化 | 第35页 |
| 3.1.7 质粒小提 | 第35页 |
| 3.1.8 In-fusionTM实验 | 第35-36页 |
| 3.2 结果 | 第36-38页 |
| 3.2.1 overlap PCR电泳结果 | 第36页 |
| 3.2.2 遗传标记鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 感染性克隆的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 rFPV病毒拯救与鉴定 | 第39-48页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-42页 |
| 4.1.1 试剂 | 第39页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 4.1.3 F81细胞复苏与传代培养 | 第39页 |
| 4.1.4 F81细胞瞬时转染实验 | 第39-40页 |
| 4.1.5 rFPV病毒培养 | 第40页 |
| 4.1.6 间接免疫荧光实验 | 第40页 |
| 4.1.7 FPV多步生长曲线的绘制 | 第40页 |
| 4.1.8 Western Blot实验 | 第40-41页 |
| 4.1.9 遗传标签酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 4.1.10 血凝鉴定 | 第42页 |
| 4.2 结果 | 第42-47页 |
| 4.2.1 CPE鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.2 遗传标记酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.3 间接免疫荧光鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.4 拯救病毒rFPV增殖特性结果 | 第45-46页 |
| 4.2.5 Western Blot检测rFPV | 第46页 |
| 4.2.6 血凝鉴定结果 | 第46-47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 全文结论 | 第48-49页 |
| 5.1 结论 | 第48页 |
| 5.2 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
