| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 植物叶色突变基因的克隆及其分子机制 | 第11-15页 |
| 1.1 叶绿素合成途径中的基因突变 | 第11-12页 |
| 1.2 叶绿素降解途径中的基因突变 | 第12-14页 |
| 1.3 叶绿体发育过程的基因突变 | 第14-15页 |
| 1.4 其他途径基因的突变 | 第15页 |
| 2 植物叶色突变基因的育种应用 | 第15-17页 |
| 2.1 叶色突变体可应用于高光效育种的研究 | 第15-16页 |
| 2.2 叶色变异可作为标记性状应用于杂交育种 | 第16页 |
| 2.3 叶色突变体可作为改良作物品质性状的资源 | 第16-17页 |
| 3 理论意义和实际意义 | 第17-18页 |
| 第二章 水稻DGP1基因的敲除功能验证 | 第18-24页 |
| 1 材料与方法 | 第18-20页 |
| 1.1 材料与种植方法 | 第18页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9载体的构建 | 第18页 |
| 1.3 载体的农杆菌转化 | 第18-19页 |
| 1.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第19页 |
| 1.4.1 愈伤组织的诱导 | 第19页 |
| 1.4.2 农杆菌侵染 | 第19页 |
| 1.4.3 抗性愈伤的筛选及植株再生 | 第19页 |
| 1.5 转基因植株的检测与鉴定 | 第19-20页 |
| 1.5.1 水稻基因组DNA的提取 | 第19-20页 |
| 1.5.2 PCR扩增与电泳 | 第20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-22页 |
| 2.1 DGP1基因敲除载体的构建及其突变体的获得 | 第20页 |
| 2.2 敲除突变转基因植株的PCR鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3 转基因植株的DGP1基因测序鉴定 | 第21页 |
| 2.4 DGP1敲除突变体表型分析 | 第21-22页 |
| 2.5 T0代dgp1转基因突变体农艺性状调查 | 第22页 |
| 3 讨论 | 第22-24页 |
| 第三章 水稻DGP1基因的过表达功能验证 | 第24-31页 |
| 1 材料与方法 | 第24-28页 |
| 1.1 植物材料种植与取样 | 第24页 |
| 1.2 水稻总RNA的提取和纯化 | 第24-25页 |
| 1.3 cDNA第一条链的合成 | 第25页 |
| 1.4 DGP1基因全长cDNA的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 1.5 DGP1基因过表达载体的构建 | 第26页 |
| 1.6 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第26页 |
| 1.7 PCR鉴定 | 第26页 |
| 1.8 转基因过表达植株表达分析 | 第26-28页 |
| 1.8.1 半定量RT-PCR表达分析 | 第26-27页 |
| 1.8.2 实时荧光qPCR表达分析 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.1 DGP1基因过表达载体的构建及转基因 | 第28页 |
| 2.2 DGP1转基因植株PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 DGP1转基因植株表达分析 | 第29页 |
| 2.4 DGP1基因过表达植株的表型分析 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 DGP1基因的生物学功能分析 | 第31-41页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 植物材料 | 第31页 |
| 1.2 水稻基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 1.3 DGP1基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 1.4 DGP1基因的组织表达分析 | 第31页 |
| 1.5 水稻DGP1基因的GUS组织化学染色 | 第31-32页 |
| 1.5.1 水稻DGP1基因GUS表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 1.5.2 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第32页 |
| 1.5.3 GUS组织化学染色 | 第32页 |
| 1.6 水稻DGP1基因的亚细胞定位 | 第32-33页 |
| 1.6.1 亚细胞定位载体的构建 | 第32页 |
| 1.6.2 农杆菌侵染法转化烟草表皮细胞 | 第32-33页 |
| 1.6.3 激光共聚焦显微镜成像检测 | 第33页 |
| 1.7 叶绿素含量的测定 | 第33页 |
| 1.8 叶绿素荧光参数测定 | 第33-34页 |
| 1.9 水稻生物量的测定 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-39页 |
| 2.1 DGP1基因在水稻不同组织中的表达分析 | 第34-35页 |
| 2.2 水稻DGP1基因的GUS组织化学染色 | 第35-36页 |
| 2.2.1 DGP1基因GUS表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.2.2 转基因水稻的GUS染色 | 第35-36页 |
| 2.3 水稻DGP1基因的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 2.3.1 亚细胞定位载体的构建 | 第36页 |
| 2.3.2 DGP1基因在烟草表皮细胞中的定位 | 第36-37页 |
| 2.4 DGP1基因对叶绿素含量的影响 | 第37-38页 |
| 2.5 DGP1基因对光合作用能力的影响 | 第38-39页 |
| 2.6 DGP1基因对水稻生物量合成的影响 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-55页 |