| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1.1 酰胺酶的来源及分类 | 第14-16页 |
| 1.2 酰胺酶催化的作用机理 | 第16页 |
| 1.3 酰胺酶的应用 | 第16-21页 |
| 1.3.1 制备手性酰胺与羧酸 | 第16-20页 |
| 1.3.2 合成手性氧肟酸 | 第20-21页 |
| 1.4 酰胺酶筛选的酶活检测方法 | 第21页 |
| 1.5 酰胺酶高通量筛选(High-throughput screening,HTS) | 第21-28页 |
| 1.5.1 检测产物NH_3 | 第22-23页 |
| 1.5.2 荧光法 | 第23-25页 |
| 1.5.3 检测H~+ | 第25页 |
| 1.5.4 基于氧肟酸与Fe(Ⅲ)的螯合特性 | 第25-26页 |
| 1.5.5 核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)法筛选酰胺酶 | 第26页 |
| 1.5.6 直接检测产物AA | 第26-27页 |
| 1.5.7 宏基因组筛选 | 第27页 |
| 1.5.8 其它方法 | 第27-28页 |
| 1.6 酰胺酶底物特异性研究 | 第28-30页 |
| 1.7 本论文研究目标和内容 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第二章 光学选择性酰胺酶产生菌的筛选 | 第34-41页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.2.1 样品 | 第34页 |
| 2.2.2 试剂 | 第34页 |
| 2.2.3 培养基 | 第34-35页 |
| 2.2.4 产酰胺酶菌株的初筛 | 第35页 |
| 2.2.5 菌株的复筛 | 第35页 |
| 2.2.6 酰胺酶催化的酰基转移反应 | 第35页 |
| 2.2.7 基于酰胺酶水解反应的酶活力及光学选择性测定 | 第35-37页 |
| 2.3 形态观察 | 第37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-40页 |
| 2.4.1 检测光学选择性的气相色谱分析方法 | 第37-38页 |
| 2.4.2 检测酶活的气相色谱分析方法 | 第38页 |
| 2.4.3 产光学酰胺酶菌株的筛选 | 第38-39页 |
| 2.4.4 菌落形态 | 第39-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40页 |
| 参考文献 | 第40-41页 |
| 第三章 立体选择性酰胺酶产生菌ZJB-09214的鉴定及其特性研究 | 第41-60页 |
| 3.1 引言 | 第41-42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 菌株 | 第42页 |
| 3.2.2 主要药品与试剂 | 第42页 |
| 3.2.3 酵母菌鉴定试条 | 第42页 |
| 3.2.4 主要实验设备与仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.5 培养基(g/L) | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.3.1 菌种的活化 | 第44页 |
| 3.3.2 菌种鉴定 | 第44-46页 |
| 3.3.3 菌株ZJB-09214产酶培养基的确定 | 第46页 |
| 3.3.4 转化温度对酶活力的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.5 转化体系pH对酶活力的影响 | 第47页 |
| 3.3.6 菌株ZJB-09214底物特异性研究 | 第47页 |
| 3.3.7 底物特异性分析方法 | 第47-49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-58页 |
| 3.4.1 形态学鉴定 | 第49-51页 |
| 3.4.2 生理生化鉴定 | 第51页 |
| 3.4.3 分子生物学鉴定 | 第51-53页 |
| 3.4.4 G.geotrichum ZJB-09214产酰胺酶初始培养基的确定 | 第53-54页 |
| 3.4.5 转化温度对酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.6 转化体系pH对G geotrichum ZJB-09214胞外酰胺酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.7 G.geotrichum ZJB-09124底物特异性的研究 | 第56-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 第四章 Ochrobactrum anthropi ZJB-09215催化合成L-色氨酸的研究 | 第60-80页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-66页 |
| 4.2.1 菌株 | 第61页 |
| 4.2.2 ID32GN试剂条 | 第61页 |
| 4.2.3 仪器设备与试剂 | 第61-62页 |
| 4.2.4 培养基 | 第62页 |
| 4.2.5 形态观察 | 第62页 |
| 4.2.6 生理生化特征的测定 | 第62-63页 |
| 4.2.7 16S rDNA的扩增和序列分析 | 第63-64页 |
| 4.2.8 系统发育学分析 | 第64页 |
| 4.2.9 静息细胞转化条件的研究 | 第64-66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-79页 |
| 4.3.0 形态特征 | 第66-67页 |
| 4.3.1 菌株ZJB-09215生理生化特征 | 第67页 |
| 4.3.2 16S rDNA序列的测定及系统发育分析 | 第67-69页 |
| 4.3.3 色氨酰胺及色氨酸单体的HPLC检测方法 | 第69-70页 |
| 4.3.4 菌体量对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.5 转化体系pH对酶活及ee值的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.6 pH稳定性研究 | 第72页 |
| 4.3.7 转化温度对酶活及ee的影响 | 第72-74页 |
| 4.3.8 热稳定性研究 | 第74页 |
| 4.3.9 底物浓度对酶活的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.10 酶促反应动力学研究 | 第75-77页 |
| 4.3.11 产物浓度对酶活的影响 | 第77页 |
| 4.3.12 底物特异性分析 | 第77-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-80页 |
| 第五章 其它5株酰胺酶产生菌的鉴定及K.pneumoniae ZJB-09217底物特异性研究 | 第80-100页 |
| 5.1 前言 | 第80-81页 |
| 5.2 材料和方法 | 第81-82页 |
| 5.2.1 菌株 | 第81页 |
| 5.2.2 ATB动鉴定试剂条 | 第81页 |
| 5.2.3 培养基 | 第81页 |
| 5.2.4 ZJB-09212,ZJB-09213,ZJB-09217,ZJB-09219细菌的菌种鉴定 | 第81-82页 |
| 5.2.5 ZJB-09216酵母菌的菌种鉴定 | 第82页 |
| 5.2.6 肺炎克雷伯菌K.pneumoniae ZJB-09217底物特异性研究 | 第82页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第82-99页 |
| 5.3.1 ZJB-09212的菌种鉴定结果 | 第82-85页 |
| 5.3.2 ZJB-09213的菌种鉴定结果 | 第85-88页 |
| 5.3.3 ZJB-09219菌种鉴定结果 | 第88-91页 |
| 5.3.4 ZJB-09217菌种鉴定结果及底物特异性分析 | 第91-95页 |
| 5.3.5 酵母菌ZJB-09216菌种鉴定 | 第95-99页 |
| 5.4 本章小结 | 第99页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-103页 |
| 6.1 结论 | 第100-101页 |
| 6.2 展望 | 第101-103页 |
| 附录 | 第103-106页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
