致谢 | 第5-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
缩写汇总 | 第15-20页 |
1 引言 | 第20-46页 |
1.1 CRISPR-Cas系统介绍 | 第20-32页 |
1.1.1 CRISPR-Cas系统的研究背景 | 第20-23页 |
1.1.2 CRISPR-Cas系统的原理和基础 | 第23-26页 |
1.1.3 CRISPR-Cas系统的分类 | 第26-27页 |
1.1.4 CRISPR-Cas系统的步骤 | 第27-32页 |
1.2 CRISPR-Cas系统与其他基因组编辑工具的比较 | 第32-40页 |
1.2.1 大范围核酸酶简介 | 第32-35页 |
1.2.2 锌指核酸酶简介 | 第35-36页 |
1.2.3 转录激活子样效应因子核酸酶简介 | 第36-38页 |
1.2.4 CRISPR-Cas系统的特点 | 第38-40页 |
1.3 anti-CRISPR基因 | 第40-42页 |
1.3.1 anti-CRISPR基因的发现 | 第40-41页 |
1.3.2 anti-CRISPR蛋白的作用机制 | 第41-42页 |
1.4 AcrF3抑制Cas3的研究意义 | 第42-46页 |
2 材料与方法 | 第46-63页 |
2.1 实验材料 | 第46页 |
2.2 实验试剂 | 第46-49页 |
2.2.1 蛋白质表达载体构建 | 第46-47页 |
2.2.2 蛋白质表达与纯化 | 第47-48页 |
2.2.3 PaCas3-AcrF3复合物结晶与优化 | 第48页 |
2.2.4 生化实验 | 第48-49页 |
2.3 实验方法 | 第49-63页 |
2.3.1 蛋白质表达载体构建 | 第49-56页 |
2.3.2 蛋白质表达与纯化 | 第56-59页 |
2.3.3 PaCas3-AcrF3复合物结晶与优化 | 第59-61页 |
2.3.4 生化实验 | 第61-63页 |
3 结果与讨论 | 第63-100页 |
3.1 蛋白质表达和纯化 | 第63-71页 |
3.1.1 AcrF3的纯化 | 第63-65页 |
3.1.2 PaCas3与AcrF3的相互作用及其复合物纯化 | 第65-69页 |
3.1.3 EcCas3与AcrF3的相互作用 | 第69-71页 |
3.2 PaCas3-AcrF3复合物的结晶与结构解析 | 第71-79页 |
3.2.1 PaCas3-AcrF3复合物的结晶与晶体优化 | 第71-73页 |
3.2.2 PaCas3-AcrF3复合物晶体的数据收集与处理 | 第73-79页 |
3.3 PaCas3-AcrF3复合物晶体结构 | 第79-96页 |
3.3.1 PaCas3-AcrF3复合物的整体结构 | 第79-80页 |
3.3.2 PaCas3氨基端的Cas2结构域 | 第80-82页 |
3.3.3 PaCas3的结构 | 第82-83页 |
3.3.4 PaCas3的HD核酸酶结构域 | 第83-86页 |
3.3.5 ADP结合状态的PaCas3 | 第86-87页 |
3.3.6 AcrF3二聚体的结构 | 第87-88页 |
3.3.7 AcrF3与PaCas3的相互作用 | 第88-94页 |
3.3.8 AcrF3抑制PaCas3的分子机制 | 第94-96页 |
3.4 讨论 | 第96-99页 |
3.5 结论 | 第99-100页 |
参考文献 | 第100-119页 |
作者简历 | 第119页 |