| 致谢 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 乳腺癌免疫治疗现状 | 第15-17页 |
| 1.2 基于NK细胞的肿瘤免疫治疗 | 第17-19页 |
| 1.3 NKG2D-NKG2DL在NK细胞免疫治疗中的作用和调控 | 第19-21页 |
| 2 白藜芦醇对乳腺癌细胞MICA/B表达及增殖的影响 | 第21-39页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 研究思路 | 第22-23页 |
| 2.3 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.3.2 常用溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.3.3 主要耗材和设备 | 第24页 |
| 2.3.4 实验细胞和动物 | 第24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.4.2 流式细胞术检测MICA/MICB表达 | 第25页 |
| 2.4.3 实时定量PCR检测MICA和MICB mRNA表达 | 第25-27页 |
| 2.4.3.1 细胞总mRNA提取 | 第25-26页 |
| 2.4.3.2 逆转录 | 第26页 |
| 2.4.3.3 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.4.4 BALB/c裸鼠体内成瘤实验 | 第27-28页 |
| 2.4.5 H&E染色检测细胞形态 | 第28页 |
| 2.4.6 免疫组织化学检测MICA/B表达情况 | 第28-29页 |
| 2.4.7 MTT检测细胞活性 | 第29页 |
| 2.4.8 Annexin V-FITC/PI双染检测凋亡 | 第29-30页 |
| 2.4.9 统计学分析 | 第30页 |
| 2.5 结果 | 第30-37页 |
| 2.5.1 白藜芦醇在体外上调乳腺癌细胞MICA/B的表达 | 第30-32页 |
| 2.5.2 白藜芦醇增加裸鼠移植瘤的MICA/B表达 | 第32-33页 |
| 2.5.3 白藜芦醇体外抑制乳腺癌细胞的增殖 | 第33-35页 |
| 2.5.4 白藜芦醇抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长 | 第35-37页 |
| 2.6 讨论 | 第37-38页 |
| 2.7 小结 | 第38-39页 |
| 3 白藜芦醇增加乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性 | 第39-49页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 研究思路 | 第39-40页 |
| 3.3 材料 | 第40-41页 |
| 3.3.1 主要试剂 | 第40页 |
| 3.3.2 主要耗材和设备 | 第40-41页 |
| 3.3.3 实验细胞和动物 | 第41页 |
| 3.4 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.4.1 体外杀伤实验 | 第41-42页 |
| 3.4.2 小鼠肺清除实验 | 第42页 |
| 3.4.3 统计学分析 | 第42-43页 |
| 3.5 结果 | 第43-46页 |
| 3.5.1 白藜芦醇在体外增加乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性 | 第43-44页 |
| 3.5.2 白藜芦醇在小鼠体内增加NK细胞对乳腺癌细胞的清除 | 第44-46页 |
| 3.6 讨论 | 第46-47页 |
| 3.7 小结 | 第47-49页 |
| 4 白藜芦醇上调乳腺癌细胞MICA/B表达的机制研究 | 第49-75页 |
| 4.1 白藜芦醇下调乳腺癌细胞MIR-17的表达 | 第49-56页 |
| 4.1.1 前言 | 第49-50页 |
| 4.1.2 研究思路 | 第50-51页 |
| 4.1.3 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.4 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.1.4.1 实时荧光定量PCR | 第52页 |
| 4.1.4.2 靶标的生物信息学预测分析 | 第52-53页 |
| 4.1.4.3 统计学分析 | 第53页 |
| 4.1.5 结果 | 第53-56页 |
| 4.1.5.1 白藜芦醇抑制乳腺癌细胞miR-17-92家族表达 | 第53-54页 |
| 4.1.5.2 MiR-17-92家族与MICA/B基因靶向关系的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 4.1.5.3 MiR-17在乳腺癌细胞系和临床标本中高表达 | 第55-56页 |
| 4.1.6 讨论与小结 | 第56页 |
| 4.2 MICA和MICB是MIR-17的靶标 | 第56-65页 |
| 4.2.1 前言 | 第56-57页 |
| 4.2.2 研究思路 | 第57-58页 |
| 4.2.3 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.2.4.1 细胞转染 | 第59-60页 |
| 4.2.4.2 靶基因3'-UTR psiCHECK-2质粒的构建 | 第60页 |
| 4.2.4.3 双荧光素酶报告基因检测 | 第60-61页 |
| 4.2.4.4 统计学分析 | 第61页 |
| 4.2.5 结果 | 第61-64页 |
| 4.2.5.1 miR-17抑制MICA和MICB的表达 | 第61-63页 |
| 4.2.5.2 MICA和MICB是miR-17的靶基因 | 第63-64页 |
| 4.2.6 讨论与小结 | 第64-65页 |
| 4.3 白藜芦醇下调C-MYC表达,c-MYC可调控MIR-17-92基因簇的转录 | 第65-75页 |
| 4.3.1 前言 | 第65-66页 |
| 4.3.2 研究思路 | 第66-67页 |
| 4.3.3 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.3.4 实验方法 | 第68-71页 |
| 4.3.4.1 siRNA转染 | 第68页 |
| 4.3.4.2 过表达质粒的构建与转染 | 第68-69页 |
| 4.3.4.3 Western blot | 第69-71页 |
| 4.3.4.4 统计学分析 | 第71页 |
| 4.3.5 结果 | 第71-73页 |
| 4.3.5.1 白藜芦醇下调乳腺癌细胞c-Myc表达 | 第71-72页 |
| 4.3.5.2 c-Myc促进miR-17-92基因簇的转录 | 第72-73页 |
| 4.3.6 讨论与小结 | 第73-75页 |
| 5 临床标本和TCGA数据库数据分析 | 第75-83页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 研究思路 | 第75-76页 |
| 5.3 材料 | 第76-77页 |
| 5.4 实验方法 | 第77页 |
| 5.4.1 临床标本的实时荧光定量PCR | 第77页 |
| 5.4.2 TCGA数据库的数据获取与分析 | 第77页 |
| 5.4.3 统计学分析 | 第77页 |
| 5.5 结果 | 第77-82页 |
| 5.6 讨论和小结 | 第82-83页 |
| 6 全文总结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-99页 |
| 综述 | 第99-121页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第121页 |
