| 中文摘要 | 第12-13页 |
| 英文摘要 | 第13-14页 |
| 1. 前言 | 第15-22页 |
| 1.1 百合体细胞胚发生的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 基因型、外植体对百合体细胞胚发生的影响 | 第15页 |
| 1.1.2 常用激素对百合体细胞胚发生的影响 | 第15-17页 |
| 1.1.3 光照条件对百合体细胞胚发生的影响 | 第17页 |
| 1.1.4 基于体细胞胚的遗传转化受体系统的建立 | 第17-18页 |
| 1.2 miRNA对植物体细胞胚发生的调控作用 | 第18-19页 |
| 1.3 miR171及其靶基因研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 miR171及其靶基因对植物生长发育的调控 | 第19-20页 |
| 1.3.2 miR171及其靶基因对植物体细胞胚发生的调控 | 第20-21页 |
| 1.4 植物内源诱捕靶标(eTM)的研究进展 | 第21页 |
| 1.5 本文研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2. lpu-miR171a/b和lda-miR171a/c的克隆 | 第22-29页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试验试剂及仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基和溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.4 RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.5 miR171的特异茎环反转录 | 第24-25页 |
| 2.1.6 lpu-miR171a/b和lda-miR171a/c的PCR扩增反应 | 第25-26页 |
| 2.1.7 PCR扩增产物的纯化 | 第26页 |
| 2.1.8 目的片段的连接、转化及测序 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-28页 |
| 2.2.1 细叶百合及兰州百合总RNA提取结果 | 第27-28页 |
| 2.2.2 lpu-miR171a/b和lda-miR171a/c的克隆 | 第28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-29页 |
| 3. 靶基因LpSCL6-Ⅰ/Ⅱ和LdSCL6-Ⅲ的克隆及序列分析 | 第29-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-31页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第29页 |
| 3.1.2 试验试剂及仪器 | 第29页 |
| 3.1.3 LpSCL6-Ⅰ、LpSCL6-Ⅱ和LdSCL6-Ⅲ的反转录 | 第29-30页 |
| 3.1.4 靶基因的PCR扩增反应 | 第30页 |
| 3.1.5 PCR产物测序及生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 3.2 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.2.1 靶基因SCL6的PCR扩增 | 第31页 |
| 3.2.2 靶基因SCL6蛋白保守结构域分析 | 第31页 |
| 3.2.3 靶基因SCL6氨基酸序列比对分析 | 第31-33页 |
| 3.2.4 靶基因SCL6进化树构建 | 第33页 |
| 3.2.5 蛋白基本理化性质的预测 | 第33-34页 |
| 3.2.6 SCL6蛋白的二级结构预测及分析 | 第34页 |
| 3.3 讨论 | 第34-36页 |
| 4. miR171靶基因作用位点的鉴定 | 第36-43页 |
| 4.1 材料方法 | 第36-41页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第36页 |
| 4.1.2 试验试剂及仪器 | 第36页 |
| 4.1.3 总RNA提取及mRNA纯化 | 第36-38页 |
| 4.1.4 cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| 4.1.5 RLM-5'RACE扩增 | 第39-40页 |
| 4.1.6 目的片段的回收、连接及转化 | 第40-41页 |
| 4.1.7 测序结果的比对分析 | 第41页 |
| 4.2 结果与分析 | 第41-42页 |
| 4.2.1 RLM-5'RACE扩增5'末端产物分析 | 第41页 |
| 4.2.2 miR171切割位点序列分析 | 第41-42页 |
| 4.3 讨论 | 第42-43页 |
| 4.3.1 miR171靶基因作用位点鉴定的必要性 | 第42页 |
| 4.3.2 百合体胚发育过程中miR171切割靶位点的特异性 | 第42-43页 |
| 5. 百合体胚发生过程中miR171及靶基因SCL6表达谱构建 | 第43-53页 |
| 5.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第43页 |
| 5.1.2 试验试剂及仪器 | 第43页 |
| 5.1.3 RNA提取及cDNA合成 | 第43页 |
| 5.1.4 miR171及其靶基因SCL6的qRT-PCR引物设计 | 第43-44页 |
| 5.1.5 miR171及其靶基因SCL6的qRT-PCR分析 | 第44-45页 |
| 5.1.6 数据分析 | 第45页 |
| 5.2 结果分析 | 第45-51页 |
| 5.2.1 引物特异性分析 | 第45-46页 |
| 5.2.2 引物的扩增效率分析 | 第46-50页 |
| 5.2.3 百合体胚发育不同时期miR171及SCL6的表达关联性分析 | 第50-51页 |
| 5.3 讨论 | 第51-53页 |
| 5.3.1 miR171及其靶基因SCL6在百合体胚发育不同时期qRT-PCR分析 | 第51-52页 |
| 5.3.2 miR171及其靶基因SCL6在百合体胚发育不同时期的表达相关性分析 | 第52-53页 |
| 6. miR171内源诱捕靶标的预测 | 第53-57页 |
| 6.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 6.1.1 转录组范围内内源诱捕靶标的预测 | 第53页 |
| 6.1.2 Python脚本的编写 | 第53-55页 |
| 6.2 结果分析 | 第55-56页 |
| 6.2.1 lpu-miR171a的内源诱捕靶标 | 第55页 |
| 6.2.2 lpu-miR171b的内源诱捕靶标 | 第55-56页 |
| 6.2.3 lda-miR171a的内源诱捕靶标 | 第56页 |
| 6.2.4 lda-miR171c的内源诱捕靶标 | 第56页 |
| 6.3 讨论 | 第56-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 主要创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第68页 |
