| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 Botryosphaeria dothidea致病作用研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 根癌农杆菌介导的遗传转化研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 根癌农杆菌介导转化的一般方法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 根癌农杆菌介导的丝状真菌转化的特点 | 第13页 |
| 1.3 T-DNA插入突变体库的构建及相关突变体的筛选 | 第13-14页 |
| 1.4 侧翼序列克隆技术研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 供试菌株及培养条件 | 第17页 |
| 2.1.1 真菌菌株及培养条件 | 第17页 |
| 2.1.2 细菌菌株及培养条件 | 第17页 |
| 2.2 培养基 | 第17-18页 |
| 2.3 常规分子生物学实验技术 | 第18-19页 |
| 2.3.1 PCR反应 | 第18-19页 |
| 2.3.2 DNA琼脂凝胶电泳 | 第19页 |
| 2.4 B. dothidea菌株原生质体的制备 | 第19-20页 |
| 2.4.1 B. dothidea菌丝的准备 | 第19页 |
| 2.4.2 酶解液的准备 | 第19页 |
| 2.4.3 B. dothidea原生质体的制备 | 第19-20页 |
| 2.5 B. dothidea菌株的T-DNA转化 | 第20页 |
| 2.6 转化子稳定性分析 | 第20页 |
| 2.7 转化子潮霉素抗性基因PCR检测 | 第20-23页 |
| 2.7.1 CTAB法提取基因组DNA | 第20-21页 |
| 2.7.2 质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.7.3 PCR验证 | 第22页 |
| 2.7.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.8 突变体菌落形态观察 | 第23页 |
| 2.9 突变体生长速率测定 | 第23页 |
| 2.10 突变体致病性鉴定 | 第23-24页 |
| 2.11 突变体菌株T-DNA插入位点侧翼序列的扩增和分析 | 第24-27页 |
| 2.11.1 突变体菌株DNA的提取 | 第24页 |
| 2.11.2 热不对称交错PCR（hiTAIL-PCR） | 第24-25页 |
| 2.11.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.11.4 hiTAIL-PCR扩增产物的凝胶回收 | 第25页 |
| 2.11.5 DNA片段连接 | 第25-26页 |
| 2.11.6 大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl_2法） | 第26页 |
| 2.11.7 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2.11.8 菌落PCR | 第26-27页 |
| 2.11.9 侧翼序列比对与分析 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-38页 |
| 3.1 B. dothidea SDAU11-126 在PDA上的菌落形态 | 第27页 |
| 3.2 B. dothidea菌株对潮霉素B的敏感性测定 | 第27-28页 |
| 3.3 原生质体制备 | 第28页 |
| 3.4 根癌农杆菌介导转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, ATMT） | 第28页 |
| 3.5 转化子的遗传稳定性分析 | 第28页 |
| 3.6 转化子潮霉素抗性基因PCR检测 | 第28-29页 |
| 3.7 突变体菌落形态观察 | 第29-30页 |
| 3.8 突变体生长特性测定分析 | 第30-31页 |
| 3.9 突变体致病性测定 | 第31-34页 |
| 3.10 突变体菌株T-DNA插入位点侧翼序列的扩增和分析 | 第34-38页 |
| 3.10.1 突变体LW-27T-DNA插入位点侧翼序列测定和分析 | 第35-36页 |
| 3.10.2 突变体LW-31T-DNA插入位点侧翼序列测定和分析 | 第36页 |
| 3.10.3 突变体LW-64T-DNA插入位点侧翼序列测定和分析 | 第36页 |
| 3.10.4 突变体LW-100T-DNA插入位点侧翼序列测定和分析 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 4.1 关于根癌农杆菌介导B. dothidea的遗传转化 | 第38页 |
| 4.2 关于突变体的筛选 | 第38-39页 |
| 4.3 关于T-DNA插入位点的侧翼序列获得及分析 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 5.1 突变体库的构建 | 第41页 |
| 5.2 突变体的筛选 | 第41页 |
| 5.3 T-DNA插入位点的侧翼序列获得及分析 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 附录1 各突变体菌株中PCR扩增出的右侧翼序列信息 | 第48-55页 |
| 1.1 突变体LW-27T-DNA插入位点测序比对结果 | 第48-49页 |
| 1.2 突变体LW-31T-DNA插入位点测序比对结果 | 第49-51页 |
| 1.3 突变体LW-100T-DNA插入位点测序比对结果 | 第51-53页 |
| 1.4 突变体LW-64T-DNA插入位点测序比对结果 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
