| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 图片目录 | 第15-17页 |
| 表格目录 | 第17-18页 |
| 符号说明 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-43页 |
| 1.1 流感病毒和流感疫苗 | 第21-26页 |
| 1.1.1 流感病毒结构 | 第21-22页 |
| 1.1.2 流感病毒分类与抗原多变性 | 第22-23页 |
| 1.1.3 流感疫苗的种类 | 第23-26页 |
| 1.2 动物细胞生产流感疫苗研究 | 第26-39页 |
| 1.2.1 开展动物细胞培养生产流感疫苗技术研究的重要性 | 第26-30页 |
| 1.2.2 生产流感病毒疫苗常用细胞系 | 第30-32页 |
| 1.2.3 细胞培养生产流感病毒常用反应器系统 | 第32-34页 |
| 1.2.4 影响搅拌式生物反应器系统生产流感病毒因素分析 | 第34-39页 |
| 1.3 微载体培养过程中细胞放大培养方式 | 第39-40页 |
| 1.4 细胞培养及病毒生产过程中代谢分析 | 第40-41页 |
| 1.5 课题目的和意义 | 第41-42页 |
| 1.6 实验设计 | 第42-43页 |
| 第二章 VERO 细胞微载体培养生产流感病毒 | 第43-68页 |
| 2.1 前言 | 第43页 |
| 2.2 实验材料、仪器和试剂 | 第43-45页 |
| 2.2.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-52页 |
| 2.3.1 流感病毒在鸡胚中接种 | 第45页 |
| 2.3.2 Vero 细胞复苏和培养皿培养 | 第45-46页 |
| 2.3.3 H9N2 禽流感病毒在Vero 细胞上的传代适应 | 第46页 |
| 2.3.4 TPCK-胰酶含量对流感病毒增殖的影响 | 第46页 |
| 2.3.5 pH 值对流感病毒增殖的影响 | 第46页 |
| 2.3.6 Cytodex 3 微载体处理 | 第46-47页 |
| 2.3.7 Vero 细胞微载体培养 | 第47页 |
| 2.3.8 Vero 细胞接种密度的确定 | 第47页 |
| 2.3.9 微载体含量的确定 | 第47页 |
| 2.3.10 搅拌转速的确定 | 第47页 |
| 2.3.11 流感病毒微载体培养和感染复数MOI 的确定 | 第47-48页 |
| 2.3.12 流感病毒在Vero 细胞上增殖最适收毒时间的确定 | 第48页 |
| 2.3.13 流感病毒血凝滴度测定 | 第48页 |
| 2.3.14 病毒空斑测定 | 第48-49页 |
| 2.3.15 细胞结晶紫计数方法 | 第49页 |
| 2.3.16 生长动力学分析 | 第49-50页 |
| 2.3.17 实验试剂与配制方法 | 第50-52页 |
| 2.4 结果与分析讨论 | 第52-66页 |
| 2.4.1 流感病毒在Vero 细胞上传代适应 | 第52-53页 |
| 2.4.2 TPCK-胰酶含量对流感病毒增殖的影响 | 第53-54页 |
| 2.4.3 pH 值对流感病毒增殖的影响 | 第54-55页 |
| 2.4.4 Vero 细胞的微载体培养 | 第55-63页 |
| 2.4.5 流感病毒微载体培养和感染复数MOI 对病毒增殖的影响 | 第63-65页 |
| 2.4.6 流感病毒在转瓶中增殖最适病毒收获时间的确定 | 第65-66页 |
| 2.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第三章 珠到珠转移扩大培养 VERO 细胞和生产流感病毒研究 | 第68-90页 |
| 3.1 前言 | 第68-69页 |
| 3.2 实验材料、仪器和试剂 | 第69-70页 |
| 3.3 实验方法 | 第70-75页 |
| 3.3.1 Vero 细胞的微载体培养 | 第70页 |
| 3.3.2 Vero 细胞珠到珠转移过程建桥效率分析 | 第70页 |
| 3.3.3 田口正交实验设计 | 第70-72页 |
| 3.3.4 Vero 细胞珠到珠两阶段转移过程 | 第72页 |
| 3.3.5 胰酶在两阶段微载体转移中的作用 | 第72-73页 |
| 3.3.6 Vero 细胞珠到珠转移后对流感病毒的增殖 | 第73页 |
| 3.3.7 微载体取样方法 | 第73页 |
| 3.3.8 微载体细胞计数 | 第73页 |
| 3.3.9 微载体显微观察 | 第73-75页 |
| 3.4 结果与分析讨论 | 第75-88页 |
| 3.4.1 Vero 细胞珠到珠转移过程中的新载体建桥效率的优化 | 第75-78页 |
| 3.4.2 Vero 细胞的两阶段珠到珠转移过程 | 第78-83页 |
| 3.4.3 胰酶在两阶段微载体转移中的作用 | 第83-85页 |
| 3.4.4 Vero 细胞珠到珠转移后对流感病毒的增殖 | 第85-88页 |
| 3.5 本章小结 | 第88-90页 |
| 第四章 VERO 细胞无血清培养和封闭连续细胞培养生产流感病毒工艺过程模拟 | 第90-110页 |
| 4.1 前言 | 第90-91页 |
| 4.2 实验原料?试剂与仪器 | 第91-92页 |
| 4.3 实验方法 | 第92-95页 |
| 4.3.1 EX-CELL TM Vero 无血清培养基的配制 | 第92页 |
| 4.3.2 Vero 细胞对EX-CELL TM Vero 无血清培养基直接适应和建立细胞库 | 第92页 |
| 4.3.3 不同微载体对Vero 细胞吸附的影响 | 第92-93页 |
| 4.3.4 不同搅拌方式对Vero 细胞吸附的影响 | 第93页 |
| 4.3.5 CaC12对Vero 细胞吸附的影响 | 第93-94页 |
| 4.3.6 Vero 细胞无血清微载体培养和流感病毒生产 | 第94页 |
| 4.3.7 Vero 细胞无血清培养基培养后不换液直接进行病毒生产 | 第94页 |
| 4.3.8 多次间歇式珠到珠转移过程培养细胞生产流感病毒 | 第94-95页 |
| 4.3.9 葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和氨的测定 | 第95页 |
| 4.4 实验结果与分析讨论 | 第95-109页 |
| 4.4.1 不同微载体对Vero 细胞吸附的影响 | 第96-97页 |
| 4.4.2 不同搅拌方式对Vero 细胞吸附的影响 | 第97-98页 |
| 4.4.3 CaC12对Vero 细胞吸附的影响 | 第98-99页 |
| 4.4.4 Vero 细胞无血清微载体培养生产流感病毒及代谢分析 | 第99-103页 |
| 4.4.5 无血清培养Vero 细胞不换液进行病毒感染过程分析 | 第103-104页 |
| 4.4.6 细胞珠到珠转移后生产流感病毒的多循环间歇操作 | 第104-109页 |
| 4.5 本章小结 | 第109-110页 |
| 第五章 封闭连续式细胞培养生产流感病毒工艺过程的设计及其数学模型分析 | 第110-121页 |
| 5.1 前言 | 第110-111页 |
| 5.2 系统流程示意图 | 第111页 |
| 5.3 系统的操作 | 第111-112页 |
| 5.3.1 系统准备 | 第111-112页 |
| 5.3.2 细胞的接种和灌注培养 | 第112页 |
| 5.3.3 病毒的初级增殖和细胞的放大培养 | 第112页 |
| 5.3.4 细胞的连续培养和病毒的连续增殖 | 第112页 |
| 5.4 模型假设 | 第112-113页 |
| 5.5 连续培养过程时系统物料平衡分析 | 第113-120页 |
| 5.5.1 细胞培养反应器中的物料平衡分析 | 第113-115页 |
| 5.5.2 病毒增殖反应器中的物料平衡分析 | 第115-120页 |
| 5.6 本章小结 | 第120-121页 |
| 全文总结与展望 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及申请的专利 | 第134-136页 |
