| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 Stathmin 蛋白的研究进展 | 第14-19页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 Stathmin 超家族 | 第14-15页 |
| ·Stathmin 超家族蛋白的分类与分布 | 第14页 |
| ·Stathmin 超家族蛋白的结构域 | 第14-15页 |
| 2 Stathmin 蛋白与信号传导 | 第15-16页 |
| ·MAPK 对Stathmin 信号通路的调控 | 第15-16页 |
| ·CDK1 对Stathmin 信号通路的调控 | 第16页 |
| ·Stat3 调控 | 第16页 |
| ·p53 调控 | 第16页 |
| 3 Stathmin 的研究现状 | 第16-18页 |
| ·Stathmin 在哺乳动物中的研究 | 第17页 |
| ·Stathmin 在人类中的研究 | 第17页 |
| ·Stathmin 在小鼠中的研究 | 第17页 |
| ·Stathmin 在昆虫中的研究 | 第17-18页 |
| ·Stathmin 在果蝇中的研究 | 第17-18页 |
| ·Stathmin 在家蚕中的研究 | 第18页 |
| 4 展望 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第19-22页 |
| 1 实验目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 研究重点 | 第20-21页 |
| 4 实验流程 | 第21-22页 |
| 第三章 序列分析 | 第22-31页 |
| 1 生物信息学工具 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-29页 |
| ·BmSTMN 基因的基本信息 | 第22-23页 |
| ·BmSTMN 蛋白的疏水性分析 | 第23-24页 |
| ·BmSTMN 蛋白的跨膜区预测 | 第24-25页 |
| ·BmSTMN 蛋白的信号肽分析 | 第25页 |
| ·BmSTMN 基因推测的氨基酸序列同源性分析 | 第25-27页 |
| ·进化树的构建 | 第27页 |
| ·BmSTMN 细胞内定位分析 | 第27-28页 |
| ·BmSTMN 蛋白的二级结构的预测 | 第28页 |
| ·BmSTMN 蛋白的高级结构的预测 | 第28-29页 |
| ·Bm STMN 磷酸化位点预测 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 BmSTMN 的克隆、表达、纯化及抗体制备 | 第31-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·试剂与仪器 | 第31页 |
| ·试剂的配制 | 第31-35页 |
| ·分子克隆及表达纯化常规试剂 | 第31-32页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第32-33页 |
| ·反相FPLC 纯化用试剂 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第33页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第33-34页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第34页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第34页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第34-35页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-46页 |
| ·BmSTMN 基因的克隆 | 第35-39页 |
| ·PCR 获得完整的ORF 序列 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a 的双酶切 | 第36-37页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37页 |
| ·E.coli TG1、Rosetta (DE3)感受态细胞的制备(CaC12 法) | 第37-38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38-39页 |
| ·PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·BmSTMN 基因序列的测定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第40页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第40-42页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第42页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第43页 |
| ·抗体的制备 | 第43-44页 |
| ·抗原的制备 | 第43页 |
| ·免疫动物 | 第43页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第43-44页 |
| ·抗体的效价测定 | 第44-45页 |
| ·抗体的纯化 | 第45页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| ·ORF 的PCR 扩增结果 | 第46页 |
| ·重组质粒的PCR 扩增和双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·序列测定 | 第47页 |
| ·pET-28a(+)-BmSTMN 的诱导表达及纯化 | 第47-48页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第48页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第48-49页 |
| ·抗体效价测定 | 第49-50页 |
| ·抗体纯化 | 第50页 |
| ·Western blotting 检测 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 BmSTMN 的表达分析及其分布 | 第53-67页 |
| 1 材料与试剂 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·蛋白提取裂解液（100 mL） | 第53-54页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第54页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第54页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-58页 |
| ·总RNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第55页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR | 第56页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第56-57页 |
| ·蛋白质的抽提 | 第57页 |
| ·ELISA 半定量检测BmSTMN 在各组织、时期中的含量 | 第57页 |
| ·Western blotting 检测BmSTMN 的分布 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第57页 |
| ·Western blotting | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-65页 |
| ·家蚕发育过程中BmSTMN mRNA 表达量的变化 | 第58-59页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中Bm STMN 表达量分析 | 第59-62页 |
| ·BmSTMN 在各时期及五龄幼虫各组织中总蛋白中的含量 | 第62-64页 |
| ·制作ELISA 标准曲线 | 第62页 |
| ·ELISA 半定量测定家蚕各时期中BmSTMN 含量 | 第62-63页 |
| ·ELISA 半定量测定五龄幼虫各组织中BmSTMN 含量 | 第63-64页 |
| ·家蚕发育过程中BmSTMN 的表达量的比较 | 第64页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmSTMN 的表达量的比较 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 亚细胞定位 | 第67-70页 |
| 1 试剂与材料 | 第67页 |
| ·材料与设备 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
