摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-26页 |
1.1 弹状病毒的概况 | 第14-16页 |
1.1.1 弹状病毒的分类 | 第14页 |
1.1.2 弹状病毒的生物学信息 | 第14-15页 |
1.1.3 弹状病毒结构特点 | 第15-16页 |
1.2 鱼类弹状病毒的研究进展 | 第16-17页 |
1.3 乌鳢水泡病毒病的研究现状 | 第17页 |
1.4 细胞自噬的研究概况 | 第17-25页 |
1.4.1 细胞自噬的种类 | 第18页 |
1.4.2 细胞自噬发生的分子机制 | 第18-20页 |
1.4.3 细胞自噬的调控机制 | 第20-21页 |
1.4.4 细胞自噬和自噬流的检测标准 | 第21-23页 |
1.4.5 细胞自噬与病毒感染关系的研究现状 | 第23-24页 |
1.4.6 细胞自噬与机体免疫系统间关系的研究进展 | 第24-25页 |
1.5 研究目的与意义 | 第25-26页 |
第二章 SHVV感染SSN-1 诱导细胞自噬 | 第26-49页 |
2.1 实验材料 | 第26-30页 |
2.1.1 细胞与病毒 | 第26页 |
2.1.2 载体与质粒 | 第26-27页 |
2.1.3 引物序列 | 第27-28页 |
2.1.4 实验试剂 | 第28页 |
2.1.5 培养基及试剂的配制 | 第28-29页 |
2.1.6 实验仪器 | 第29-30页 |
2.2 实验方法 | 第30-37页 |
2.2.1 病毒感染细胞 | 第30-31页 |
2.2.2 细胞总RNA提取 | 第31页 |
2.2.3 反转录 | 第31-32页 |
2.2.4 表达质粒的构建 | 第32页 |
2.2.5 多克隆抗体制备 | 第32-34页 |
2.2.5.1 融合蛋白诱导表达 | 第32页 |
2.2.5.2 融合蛋白纯化 | 第32-33页 |
2.2.5.3 融合蛋白免疫兔子 | 第33-34页 |
2.2.6 透射电镜观察 | 第34页 |
2.2.7 质粒转染细胞 | 第34-35页 |
2.2.8 荧光显微镜观察 | 第35页 |
2.2.9 Western blot实验 | 第35-37页 |
2.2.10 生物信息学分析 | 第37页 |
2.3 实验结果 | 第37-46页 |
2.3.1 LC3B克隆及抗体制备 | 第37-42页 |
2.3.2 乌鳢水泡病毒粒子形态学观察 | 第42-43页 |
2.3.3 透射电镜下观察自噬囊泡结构 | 第43页 |
2.3.4 荧光显微镜下观察自噬小体的点状聚集 | 第43-45页 |
2.3.5 LC3B-Ⅰ/LC3B-Ⅱ 转化及P62水平变化 | 第45-46页 |
2.4 分析讨论 | 第46-49页 |
第三章 细胞自噬抑制乌鳢水泡病毒的增殖 | 第49-56页 |
3.1 实验材料 | 第49页 |
3.1.1 细胞与病毒 | 第49页 |
3.1.2 引物序列 | 第49页 |
3.1.3 实验试剂 | 第49页 |
3.1.4 实验仪器 | 第49页 |
3.2 实验方法 | 第49-51页 |
3.2.1 MTS法测定细胞毒性 | 第49-50页 |
3.2.2 Western blot实验 | 第50页 |
3.2.3 荧光定量PCR | 第50页 |
3.2.4 TCID50测定 | 第50-51页 |
3.2.5 统计学方法 | 第51页 |
3.3 实验结果 | 第51-54页 |
3.3.1 MTS法测定细胞毒性 | 第51页 |
3.3.2 细胞自噬对SHVV蛋白水平的影响 | 第51-52页 |
3.3.3 细胞自噬对SHVV mRNA水平的影响 | 第52-53页 |
3.3.4 细胞自噬对SHVV病毒粒子释放的影响 | 第53-54页 |
3.4 分析讨论 | 第54-56页 |
第四章 乌鳢水泡病毒诱导细胞自噬的机制研究 | 第56-67页 |
4.1 实验材料 | 第56-58页 |
4.1.1 细胞和病毒 | 第56页 |
4.1.2 载体和质粒 | 第56-57页 |
4.1.3 引物序列 | 第57页 |
4.1.4 多肽序列 | 第57-58页 |
4.1.5 实验试剂 | 第58页 |
4.1.6 实验仪器 | 第58页 |
4.2 实验方法 | 第58-59页 |
4.2.1 紫外灭活病毒制备 | 第58页 |
4.2.2 Western blot实验 | 第58页 |
4.2.3 PcDNA3.1-G质粒的构建 | 第58页 |
4.2.4 SHVV-G三级结构预测 | 第58页 |
4.2.5 多肽与细胞共孵育 | 第58-59页 |
4.3 实验结果 | 第59-65页 |
4.3.1 Beclin1基因克隆及抗体制备 | 第59-60页 |
4.3.2 紫外灭活病毒鉴定 | 第60-61页 |
4.3.3 SHVV结构蛋白诱导细胞自噬 | 第61-62页 |
4.3.4 SHVV G蛋白诱导细胞自噬 | 第62-63页 |
4.3.5 诱导细胞自噬的多肽筛选 | 第63-65页 |
4.4 分析讨论 | 第65-67页 |
参考文献 | 第67-80页 |
附表:硕士期间发表论文 | 第80-81页 |
致谢 | 第81页 |