| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 1.文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 六型分泌系统概述 | 第12-18页 |
| 1.1.1 六型分泌系统简介 | 第12-14页 |
| 1.1.2 T6SS效应分子介绍 | 第14页 |
| 1.1.3 作用于细菌的效应分子 | 第14-15页 |
| 1.1.4 作用于真核生物的效应分子 | 第15-16页 |
| 1.1.5 效应分子的组装和分泌模式 | 第16-17页 |
| 1.1.6 T6SS的效应蛋白与免疫蛋白研究状况 | 第17-18页 |
| 1.2 肠外致病性大肠杆菌中T6SS研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 Rhs基因研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 Rhs基因结构及分布 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Rhs基因功能研究进展 | 第20-21页 |
| 2.研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 3.材料与方法 | 第22-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 3.1.2 细胞及实验动物 | 第23页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂、试剂盒及仪器 | 第23-24页 |
| 3.1.4 培养基与抗生素及其配制 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要缓冲液与相关溶液及其配制 | 第25-26页 |
| 3.1.6 使用引物 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 3.2.1 大肠杆菌的复苏 | 第27页 |
| 3.2.2 猪源肠外致病性大肠杆菌基因组的提取 | 第27页 |
| 3.2.3 质粒小提 | 第27-28页 |
| 3.2.4 PCR产物和酶切产物的回收纯化 | 第28页 |
| 3.2.5 大肠杆菌X7213感受态制备（氯化钙法） | 第28-29页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3.2.7 重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| 3.2.8 重组自杀性质粒的构建 | 第29-31页 |
| 3.2.9 原核表达质粒的构建 | 第31页 |
| 3.2.10 RhsCT蛋白的原核表达及SDS-PAGE鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.11 RhsCT蛋白的毒性验证 | 第32页 |
| 3.2.12 Rhs I蛋白对RhsCT蛋白的毒性中和作用验证 | 第32-33页 |
| 3.2.13 缺失株的构建及PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.14 生长特性测定 | 第34页 |
| 3.2.15 吞噬后存活试验 | 第34页 |
| 3.2.16 粘附侵入能力试验 | 第34-35页 |
| 3.2.17 小鼠感染试验 | 第35页 |
| 3.2.18 组织载菌量测定 | 第35-36页 |
| 3.2.19 使用生物学软件及网站 | 第36页 |
| 3.2.20 统计学分析 | 第36-37页 |
| 4.结果与分析 | 第37-49页 |
| 4.1 PCN033中Rhs基因分析 | 第37-38页 |
| 4.1.1 Rhs基因的确定 | 第37页 |
| 4.1.2 Rhs基因生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 4.2 猪源肠外致病性大肠杆菌Rhs1CT、Rhs2CT、Rhs3CT、Rhs4CT的原核表达 | 第38-42页 |
| 4.2.1 pET-28a-RhsCT原核表达质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 4.2.2 Rhs1CT、Rhs2CT、Rhs3CT、Rhs4CT融合蛋白的表达 | 第40页 |
| 4.2.3 Rhs1CT、Rhs2CT、Rhs3CT、Rhs4CT的抗菌毒性验证 | 第40-41页 |
| 4.2.4 pET-28a-RhsCT-RhsI重组载体的构建 | 第41-42页 |
| 4.2.5 免疫蛋白Rhs2I、Rhs3I的验证 | 第42页 |
| 4.3 基因缺失株ΔRhs1CT、ΔRhs2CT、ΔRhs3CT、ΔRhs4CT的构建 | 第42-45页 |
| 4.3.1 重组自杀性质粒的构建 | 第42-43页 |
| 4.3.2 缺失株ΔRhs1CT、ΔRhs2CT、ΔRhs3CT、ΔRhs4CT的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| 4.4 菌株生长特性测定 | 第45页 |
| 4.5 RhsCT基因致病能力分析 | 第45-47页 |
| 4.5.1 小鼠体内载菌量的比较 | 第45-46页 |
| 4.5.2 感染后死亡率的比较 | 第46-47页 |
| 4.6 吞噬后存活能力的比较 | 第47-48页 |
| 4.7 粘附侵入能力的比较 | 第48-49页 |
| 5.讨论 | 第49-52页 |
| 5.1 Rhs基因的确定 | 第49页 |
| 5.2 基因缺失突变株的构建 | 第49-50页 |
| 5.3 Rhs-CT基因的原核表达及抗菌毒性研究 | 第50页 |
| 5.4 免疫蛋白Rhs I的验证 | 第50-51页 |
| 5.5 RhsCT基因致病能力分析 | 第51页 |
| 5.6 后续工作展望 | 第51-52页 |
| 6.结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
