| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 课题背景及研究目的和意义 | 第8页 |
| 1.1.1 课题来源 | 第8页 |
| 1.1.2 课题研究目的及意义 | 第8页 |
| 1.2 MARVELD1 基因的研究现状 | 第8-9页 |
| 1.3 胚胎干细胞培养及其应用 | 第9-12页 |
| 1.3.1 胚胎干细胞的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.3.2 小鼠胚胎干细胞的培养 | 第10-11页 |
| 1.3.3 拟胚体的研究 | 第11-12页 |
| 1.3.4 胚胎干细胞研究的应用前景 | 第12页 |
| 1.4 基因敲除载体构建及打靶策略 | 第12-16页 |
| 1.4.1 基因打靶及筛选策略 | 第12-13页 |
| 1.4.2 基因敲除载体的分类 | 第13-15页 |
| 1.4.3 基因敲除技术的研究现状及其应用前景 | 第15-16页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第16-17页 |
| 1.6 本章小结 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 菌株及重组体 | 第18页 |
| 2.1.2 引物序列 | 第18页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第18-19页 |
| 2.1.4 抗体 | 第19页 |
| 2.1.5 溶液及培养基类 | 第19-21页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 细胞培养及处理 | 第22-23页 |
| 2.2.2 拟胚体形成体系建成 | 第23页 |
| 2.2.3 免疫印迹（western blot） | 第23-24页 |
| 2.2.4 实时定量 PCR | 第24-25页 |
| 2.2.5 质粒的提取 | 第25页 |
| 2.2.6 两侧同源臂的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.7 敲除载体的序列构建 | 第26-28页 |
| 2.2.8 5＇同源臂的连接与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.9 3＇同源臂的连接与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3 本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 ES 细胞及拟胚体形成中 mMARVELD1 的表达研究 | 第33-40页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 ES 细胞在滋养层及明胶上的培养 | 第33-34页 |
| 3.3 拟胚体形成 | 第34-35页 |
| 3.4 mMARVELD1 基因在 ES 细胞分化过程中的表达差异研究 | 第35-38页 |
| 3.5 讨论 | 第38页 |
| 3.6 本章小结 | 第38-40页 |
| 第4章 mMARVELD1 基因在 EB s形成中的作用 | 第40-50页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 mMARVELD1 基因 RNA 干扰后对拟胚体形成的影响 | 第40-42页 |
| 4.3 mMARVELD1 基因敲除载体构建 | 第42-47页 |
| 4.3.1 质粒提取及两侧同源臂扩增 | 第42-43页 |
| 4.3.2 敲除载体的序列构建 | 第43-44页 |
| 4.3.3 构建载体 G-Pkoxc 和 5＇同源片段的连接及其产物鉴定 | 第44-46页 |
| 4.3.4 敲除载体 5-pkoxc 和 3＇同源片段的连接及其产物鉴定 | 第46-47页 |
| 4.4 ES 细胞电转条件摸索 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-49页 |
| 4.6 本章小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-65页 |
