| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 微量元素铜的代谢机制 | 第10-12页 |
| 1.2 血脑屏障 | 第12-14页 |
| 1.3 脑微血管内皮细胞及相关蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4 氧化应激 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 试验动物 | 第17页 |
| 2.2 试剂、药品与仪器设备 | 第17-20页 |
| 2.2.1 试剂与药品 | 第17-19页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第20页 |
| 2.2.4 培养器皿的包被和处理 | 第20页 |
| 2.3 脑微血管内皮细胞的分离、培养与传代 | 第20-21页 |
| 2.4 脑微血管内皮细胞的鉴定 | 第21页 |
| 2.5 脑微血管内皮细胞的生长曲线测定 | 第21-22页 |
| 2.6 试验分组 | 第22页 |
| 2.7 铜对脑微血管内皮细胞的细胞毒性测定 | 第22-23页 |
| 2.7.1 细胞活力变化测定 | 第22页 |
| 2.7.2 乳酸脱氢酶（LDH）活性变化测定 | 第22-23页 |
| 2.8 铜对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白CLAUDIN-1，-3，-5的影响 | 第23-29页 |
| 2.8.1 蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB） | 第23-26页 |
| 2.8.2 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR） | 第26-29页 |
| 2.9 铜对脑微血管内皮细胞氧化应激的影响 | 第29-31页 |
| 2.9.1 细胞样本的前处理 | 第29页 |
| 2.9.2 超氧化物歧化酶（SOD）分型活性测定 | 第29-30页 |
| 2.9.3 过氧化物酶（CAT）活性测定 | 第30-31页 |
| 2.9.4 一氧化氮合酶（NOS）活性测定 | 第31页 |
| 2.10 数据分析 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-40页 |
| 3.1 脑微血管内皮细胞原代培养形态学观察 | 第32页 |
| 3.2 Ⅷ因子抗原免疫荧光鉴定结果 | 第32-33页 |
| 3.3 CD-144抗体流式鉴定细胞纯度 | 第33-34页 |
| 3.4 脑微血管内皮细胞的生长曲线 | 第34页 |
| 3.5 铜对脑微血管内皮细胞的细胞毒性测定结果 | 第34-35页 |
| 3.6 蛋白质免疫印迹 | 第35-36页 |
| 3.7 实时荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 3.7.1 总RNA抽提纯度与完整性检测结果 | 第36-37页 |
| 3.7.2 Claudin-1、-3、-5 mRNA表达变化 | 第37-38页 |
| 3.8 超氧化物歧化酶（SOD）分型活性测定 | 第38-39页 |
| 3.9 过氧化物酶（CAT）活性测定 | 第39页 |
| 3.10 一氧化氮合酶（NOS）活性测定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-46页 |
| 4.1 BMECS的体外模型建立 | 第40-41页 |
| 4.2 铜对BMECS的细胞毒性 | 第41-42页 |
| 4.3 铜对CLAUDIN-1、-3、-5 的影响 | 第42-44页 |
| 4.4 铜对BMECS的氧化应激影响 | 第44-46页 |
| 全文结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 附录 | 第56页 |
