| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第8-14页 |
| 1.1 神经胶质瘤治疗现状 | 第8页 |
| 1.2 替莫唑胺是临床首选的化疗药物，容易产生耐药 | 第8-9页 |
| 1.3 MGMT高表达是胶质瘤细胞对TMZ耐药的主要原因 | 第9-10页 |
| 1.4 阳离子纳米载体用于基因传递 | 第10-12页 |
| 1.5 基因和药物共传递系统 | 第12-13页 |
| 1.6 立题依据及研究意义 | 第13-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-22页 |
| 2.1 细胞株、菌种和载体 | 第14页 |
| 2.2 主要试剂 | 第14页 |
| 2.3 实验仪器 | 第14页 |
| 2.4 细胞复苏及培养 | 第14页 |
| 2.5 RNA提取及RT-PCR检测 | 第14-16页 |
| 2.5.1 细胞总RNA提取 | 第14-15页 |
| 2.5.2 反转录合成cDNA | 第15页 |
| 2.5.3 RT-PCR | 第15-16页 |
| 2.6 动物细胞全蛋白提取 | 第16页 |
| 2.7 SDS-PAGE电泳 | 第16-17页 |
| 2.8 沉默载体构建 | 第17-19页 |
| 2.8.1 靶点oligo片段的制备 | 第17页 |
| 2.8.2 载体双酶切 | 第17页 |
| 2.8.3 酶切产物凝胶回收 | 第17-18页 |
| 2.8.4 连接 | 第18页 |
| 2.8.5 转化 | 第18页 |
| 2.8.6 菌液PCR鉴定 | 第18页 |
| 2.8.7 采用“试剂盒”做大提质粒 | 第18-19页 |
| 2.9 慢病毒包装 | 第19页 |
| 2.10 细胞增殖检测方法 | 第19-20页 |
| 2.11 荧光素酶活性测定 | 第20页 |
| 2.12 建立萤火虫荧光素酶动物模型 | 第20-22页 |
| 2.12.1 T98MG-Luc细胞的构建 | 第20-21页 |
| 2.12.2 T98G-Luc裸鼠脑原位瘤模型 | 第21-22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-30页 |
| 3.1 TMZ有效抑制胶质瘤细胞的增殖 | 第22-23页 |
| 3.2 内源性MGMT在T98G和U251MG细胞中高表达 | 第23页 |
| 3.3 MGMT-shRNA构建及其沉默效率检测 | 第23-24页 |
| 3.4 MGMT-shRNA增强TMZ对胶质瘤细胞增殖的抑制作用 | 第24-25页 |
| 3.5 改性的TMZA有效抑制神经胶质瘤细胞增殖 | 第25-26页 |
| 3.6 非病毒载体PEI-PEG有效介导MGMT-shRNA-284 的表达 | 第26-27页 |
| 3.7 PEI-PEG共传递TMZA/MGMT-shRNA抑制胶质瘤细胞增殖 | 第27-28页 |
| 3.8 原位胶质瘤模型建立 | 第28-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 5 结论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-37页 |
| 致谢 | 第37页 |
