| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-15页 |
| 绪论 | 第15-19页 |
| 1 第一章 程序性替换基质物理特性诱导人多能干细胞的阶段性分化促进肌腱再生 | 第19-54页 |
| 1.1 引言 | 第19-21页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第21-27页 |
| 1.2.1 材料和试剂(如无特殊说明均为Invitrogen产品) | 第21-24页 |
| 1.2.2 实验仪器及材料 | 第24-25页 |
| 1.2.3 相关试剂的配制 | 第25-27页 |
| 1.3 实验方法 | 第27-40页 |
| 1.3.1 人包皮成纤维细胞(HFF)的分离和培养 | 第27页 |
| 1.3.2 MEF饲养层处理: | 第27-28页 |
| 1.3.3 重编程步骤方法: | 第28页 |
| 1.3.4 hiPSC-MSCs细胞在平板上诱导培养获得 | 第28-29页 |
| 1.3.5 hiPSC-MSCs鉴定 | 第29-31页 |
| 1.3.6 电流法驱动的壳聚糖—聚左旋乳酸支架的制备 | 第31-32页 |
| 1.3.7 壳聚糖—聚左旋乳酸支架的特性鉴定 | 第32页 |
| 1.3.8 细胞在支架上种植和培养 | 第32-33页 |
| 1.3.9 细胞增殖检测 | 第33页 |
| 1.3.10 扫描电子显微镜观察细胞在材料上的生长和形态 | 第33页 |
| 1.3.11 基因表达检测 | 第33-34页 |
| 1.3.12 细胞免疫荧光 | 第34-35页 |
| 1.3.13 体内实验预染细胞-Dil | 第35页 |
| 1.3.14 大鼠跟腱损伤模型 | 第35-36页 |
| 1.3.15 组织学检测 | 第36-37页 |
| 1.3.16 胶原含量测定 | 第37-38页 |
| 1.3.17 免疫组织化学 | 第38-39页 |
| 1.3.18 修复肌腱胶原纤维观察 | 第39-40页 |
| 1.3.19 力学测试 | 第40页 |
| 1.3.20 统计学分析 | 第40页 |
| 1.4 实验结果 | 第40-52页 |
| 1.4.1 光滑平板诱导iPSCs获得人诱导多能干细胞来源的间充质干细胞(hiPSC-MSCs) | 第40-42页 |
| 1.4.2 利用电流驱动的电纺丝方法制备和鉴定平行和无序纳米纤维材料 | 第42-43页 |
| 1.4.3 平行纳米纤维支架诱导hiPSC-MSCs的肌腱系分化 | 第43-47页 |
| 1.4.4 大鼠原位修复评估平行纳米纤维诱导hiPSC-MSCs肌腱分化功能和安全性 | 第47-52页 |
| 1.5 讨论 | 第52-54页 |
| 2 第二章 肌腱干细胞体外培养去分化和失功能的表观调控及干预研究 | 第54-84页 |
| 2.1 引言 | 第54-57页 |
| 2.2 实验试剂与仪器 | 第57-59页 |
| 2.2.1 材料和试剂(如无特殊说明均为Invitrogen产品) | 第57-59页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第59页 |
| 2.2.3 相关试剂配制 | 第59页 |
| 2.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 2.3.1 Scx-GFP小鼠TSPCs细胞分离和培养 | 第59页 |
| 2.3.2 细胞全基因组提取 | 第59-60页 |
| 2.3.3 DNA胞嘧啶甲基化检测 | 第60页 |
| 2.3.4 DNA胞嘧啶羟甲基化检测 | 第60页 |
| 2.3.5 细胞核分离 | 第60页 |
| 2.3.6 细胞HDAC活性检测 | 第60页 |
| 2.3.7 蛋白样本准备 | 第60-61页 |
| 2.3.8 Western-blot | 第61页 |
| 2.3.9 体外组织工程肌腱的制备 | 第61-62页 |
| 2.3.10 大鼠膑腱窗口损伤模型 | 第62页 |
| 2.3.11 其余方法同第一章 | 第62页 |
| 2.4 实验结果 | 第62-80页 |
| 2.4.1 肌腱干细胞体外培养发生去分化和失功能的连续变化 | 第62-64页 |
| 2.4.2 肌腱干细胞传代过程中的表观变化 | 第64-66页 |
| 2.4.3 筛选维持肌腱干细胞体外培养表型的小分子 | 第66-68页 |
| 2.4.4 TSA和VPA只能恢复较早代数肌腱干细胞中Scx表达 | 第68-70页 |
| 2.4.5 TSA和VPA对肌腱干细胞功能的影响 | 第70-73页 |
| 2.4.6 TSA和VPA对肌腱干细胞表型维持及分化的机制研究 | 第73-76页 |
| 2.4.7 TSA处理的肌腱干细胞在原位促进膑腱再生 | 第76-80页 |
| 2.5 讨论 | 第80-84页 |
| 3 第三章 表观调控活性平行支架促进肌腱分化的效应和机制研究 | 第84-103页 |
| 3.1 引言 | 第84-86页 |
| 3.2 实验试剂与仪器 | 第86-87页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第86页 |
| 3.2.2 实验仪器及材料 | 第86-87页 |
| 3.2.3 相关溶液的配制 | 第87页 |
| 3.3 实验方法 | 第87-88页 |
| 3.3.1 TSA修饰平行/无序支架制备 | 第87页 |
| 3.3.2 支架内TSA缓释检测 | 第87页 |
| 3.3.3 跟腱缺损动物模型建立 | 第87-88页 |
| 3.3.4 力学测试 | 第88页 |
| 3.4 实验结果 | 第88-100页 |
| 3.4.1 TSA和平行纤维支架抑制细胞HDAC活性并提高干细胞肌腱相关基因表达 | 第88-90页 |
| 3.4.2 TSA修饰/无修饰的平行/无序纳米纤维电纺丝制备与材料分析 | 第90-92页 |
| 3.4.3 肌腱干细胞在TSA修饰/无修饰的平行/无序纳米纤维上的形态及增殖 | 第92-93页 |
| 3.4.4 肌腱干细胞在TSA修饰/无修饰的平行/无序纳米纤维上的分化 | 第93-94页 |
| 3.4.5 TSA修饰平行纤维提高细胞组蛋白H3和H4乙酰化,抑制HDAC1表达 | 第94-95页 |
| 3.4.6 纳米纤维支架大鼠跟腱原位修复 | 第95-100页 |
| 3.5 讨论 | 第100-103页 |
| 4.总结 | 第103-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 综述 肌膜损伤修复策略综述 | 第115-140页 |
| 参考文献 | 第130-140页 |
| 作者简历 | 第140-142页 |
