| 符号及缩略词 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第12页 |
| 1.2 PRRS的病原学特征及研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 分类地位 | 第12-13页 |
| 1.2.2 形态结构及理化性质 | 第13页 |
| 1.2.3 基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.2.4 PRRSV的主要蛋白 | 第14-16页 |
| 1.3 PRRSV遗传变异 | 第16-17页 |
| 1.4 PRRSV毒力因子 | 第17-18页 |
| 1.4.1 nsp2基因变异与PRRSV毒力的关系 | 第17-18页 |
| 1.4.2 其他毒力相关因子 | 第18页 |
| 1.5 PRRS的临床表现与检测 | 第18-20页 |
| 1.5.1 PRRS的临床症状 | 第18-19页 |
| 1.5.2 PRRS的病理变化 | 第19-20页 |
| 1.5.3 PRRS的检测方法 | 第20页 |
| 1.6 PRRS的致病机制与防治 | 第20-22页 |
| 1.6.1 PRRS的致病机制 | 第20-21页 |
| 1.6.2 PRRS的防治方法 | 第21-22页 |
| 1.7 1433 蛋白的基因结构与生物功能 | 第22-25页 |
| 1.7.1 1433 蛋白与细胞周期 | 第23-24页 |
| 1.7.2 1433 蛋白与肿瘤 | 第24页 |
| 1.7.3 1433 蛋白的研究前景 | 第24-25页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞及毒株 | 第25页 |
| 2.1.2 质粒及感受态 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第26-29页 |
| 2.2.2 SD16株及CH-1R株病毒的准备 | 第29-31页 |
| 2.2.3 目的基因的获取 | 第31-35页 |
| 2.2.4 pEGFP-C1-nsp2重组质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.5 重组质粒pEGFP-C1-SD16-nsp2及pEGFP-C1-CH-1R-nsp2的提取 | 第38-40页 |
| 2.2.6 重组质粒转染 293T细胞 | 第40-42页 |
| 2.3 激光共聚焦检测nsp2过表达形成的aggresome区域 | 第42-43页 |
| 2.3.1 细胞爬片的制作 | 第42-43页 |
| 2.3.2 细胞的抗体孵育及封片 | 第43页 |
| 2.3.3 激光共聚焦仪器检测 | 第43页 |
| 2.4 激光共聚焦鉴定参与aggreesome形成的 1433 蛋白的亚型 | 第43-44页 |
| 2.4.1 细胞爬片的制作 | 第43-44页 |
| 2.4.2 细胞的抗体孵育及封片 | 第44页 |
| 2.4.3 激光共聚焦仪器检测 | 第44页 |
| 2.5 截短nsp2与 1433 蛋白pull-down-WB检测参与aggresome形成的关键区域 | 第44-45页 |
| 2.6 截短nsp2与 1433 蛋白共定位检测参与形成aggreesome的关键区域 | 第45-46页 |
| 2.7 1433alpha/beta抗体CoIP-WB及质谱分析 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-58页 |
| 3.1 病毒繁殖 | 第46-47页 |
| 3.1.1 病毒纯化 | 第46-47页 |
| 3.1.2 纯化病毒的TCID50检测 | 第47页 |
| 3.2 不同毒株nsp2全基因片段及分段基因片段克隆 | 第47-50页 |
| 3.2.1 pEGFP-C1载体双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.2 nsp2全基因片段重组质粒双酶切鉴定 | 第48页 |
| 3.2.3 截短nsp2重组质粒双酶切鉴定 | 第48-50页 |
| 3.2.4 测序分析 | 第50页 |
| 3.3 pEGEP-C1-nsp2蛋白的表达鉴定与纯化 | 第50-52页 |
| 3.3.1 pEGEP-C1-nsp2蛋白的免疫荧光检测 | 第50-51页 |
| 3.3.2 pEGEP-C1-nsp2蛋白的Western blot检测 | 第51-52页 |
| 3.4 激光共聚焦检测nsp2过表达形成的aggresome区域 | 第52-53页 |
| 3.5 激光共聚焦鉴定参与aggreesome形成的 1433 蛋白的亚型 | 第53-56页 |
| 3.5.1 nsp2与 1433 alpha/beta在PK-15细胞及Marc-145细胞中的共定位 | 第53-54页 |
| 3.5.2 nsp2与 1433 epsilon在PK-15和Marc-145细胞中的共定位 | 第54-55页 |
| 3.5.3 nsp2与 1433 gamma在PK-15和Marc-145细胞中的共定位 | 第55-56页 |
| 3.5.4 nsp2与 1433 theta/tau在PK-15和Marc-145细胞中的共定位 | 第56页 |
| 3.6 截短nsp2与 1433 alpha/beta亚型蛋白pull-down-WB检测参与aggresome形成的关键区域 | 第56-57页 |
| 3.7 截短nsp2与 1433 蛋白共定位检测参与形成aggreesome的关键区域 | 第57页 |
| 3.8 1433 alpha/beta抗体CoIP-WB及质谱分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第70页 |
