| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-24页 |
| 1.1 ALV-J概述 | 第15-16页 |
| 1.1.1 ALV-J的发现 | 第15页 |
| 1.1.2 ALV-J的病毒结构特征 | 第15-16页 |
| 1.1.3 ALV-J的致病性及其对生产的影响 | 第16页 |
| 1.2 REV概述 | 第16-18页 |
| 1.2.1 REV的发现 | 第16-17页 |
| 1.2.2 REV的病毒结构特征 | 第17-18页 |
| 1.2.3 REV的致病性及其对生产的影响 | 第18页 |
| 1.3 ALV-J与REV田间共感染及协同致病现象 | 第18-19页 |
| 1.4 ALV-J与REV协同感染机制研究现状 | 第19页 |
| 1.5 Exosome概述 | 第19-21页 |
| 1.5.1 Exosome的起源 | 第19页 |
| 1.5.2 Exosome的成分及其生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.5.3 Exosome与病毒 | 第20-21页 |
| 1.6 T淋巴细胞的分类及功能 | 第21-22页 |
| 1.6.1 T淋巴细胞亚群的分类及功能 | 第21-22页 |
| 1.6.2 CD4~+、CD8~+T细胞 | 第22页 |
| 1.7 IL的分类及功能 | 第22-24页 |
| 1.7.1 IL-2 的功能 | 第22-23页 |
| 1.7.2 IL-10 的功能 | 第23页 |
| 1.7.3 IL-12 的功能 | 第23-24页 |
| 1.8 本课题的研究目的和意义 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验动物、细胞及病毒 | 第24页 |
| 2.1.2 抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 试验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 实验地点 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 CEF细胞培养 | 第26页 |
| 2.2.1.1 原代CEF细胞制备 | 第26页 |
| 2.2.1.2 病毒感做及细胞培养 | 第26页 |
| 2.2.2 病毒感染情况检测 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 CEF细胞总DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 ALV-J gp85和REV LTR序列目的片段扩增 | 第27页 |
| 2.2.2.3 间接免疫荧光反应 | 第27页 |
| 2.2.2.4 细胞上清p27检测 | 第27页 |
| 2.2.3 Real-time PCR检测ALV-J和REV的相对表达量 | 第27-30页 |
| 2.2.3.1 细胞总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 RNA逆转录为c DNA | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 Real-time PCR | 第29-30页 |
| 2.2.4 激光扫描共聚焦检测ALV-J和REV蛋白表达 | 第30页 |
| 2.2.5 脾脏白细胞的分离培养 | 第30页 |
| 2.2.6 流式细胞术分析脾脏CD4~+、CD8~+T细胞表达 | 第30-31页 |
| 2.2.7 ELISA检测IL-2、IL-10、IL-12 的分泌情况 | 第31-32页 |
| 2.2.8 Exosomes的提取 | 第32页 |
| 2.2.9 负染电镜观察exosome形态 | 第32页 |
| 2.2.10 Western-blot验证exosomes | 第32-34页 |
| 2.2.10.1 Exosomes蛋白浓度检测 | 第32-33页 |
| 2.2.10.2 Western Blot实验 | 第33-34页 |
| 2.2.11 i TRAQ质谱定量实验 | 第34-36页 |
| 2.2.11.1 i TRAQ肽段标记 | 第34-35页 |
| 2.2.11.2 肽段分级 | 第35页 |
| 2.2.11.3 液相色谱（LC）-电喷雾电离（ESI）串联存储（MS/MS）质谱分析(LC-MS/MS) | 第35页 |
| 2.2.11.4 序列数据库查询及数据分析 | 第35-36页 |
| 2.2.12 Exosome RNA的提取 | 第36页 |
| 2.2.13 Exosomes micro RNA表达谱分析 | 第36-38页 |
| 2.2.13.1 Exosomes RNA样本检测 | 第36页 |
| 2.2.13.2 文库构建和上机测序 | 第36页 |
| 2.2.13.3 micro RNA信息分析 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-57页 |
| 3.1 病毒感作实验结果 | 第38-39页 |
| 3.1.1 PCR检测ALV-J、REV感染情况 | 第38页 |
| 3.1.2 IFA检测ALV-J、REV感染情况 | 第38-39页 |
| 3.1.3 p27检测ALV-J感染情况 | 第39页 |
| 3.2 Real-time PCR检测ALV-J和REV的细胞内转录水平 | 第39-41页 |
| 3.2.1 ALV-J细胞内转录水平 | 第40页 |
| 3.2.2 REV细胞内转录水平 | 第40-41页 |
| 3.3 激光共聚焦实验检测ALV-J和REV的蛋白表达水平 | 第41-42页 |
| 3.4 脾脏CD4~+、CD8~+T细胞表达结果 | 第42-43页 |
| 3.5 IL-2、IL-10、IL-12 分泌情况 | 第43-44页 |
| 3.6 负染电镜观察exosome | 第44-45页 |
| 3.7 Western Blot检测exosome标志性蛋白 | 第45-47页 |
| 3.7.1 BCA法测定exosome蛋白浓度 | 第45页 |
| 3.7.2 Western Blot检测exosome标志性蛋白Hsp70 | 第45-47页 |
| 3.8 i TRAQ蛋白质组学分析 | 第47-52页 |
| 3.8.1 蛋白质鉴定和定量结果 | 第47-48页 |
| 3.8.2 差异蛋白质分析及筛选 | 第48-52页 |
| 3.9 micro RNA表达谱分析 | 第52-55页 |
| 3.9.1 Exosome RNA样品检测 | 第52-53页 |
| 3.9.2 差异mi RNA分析及筛选 | 第53-55页 |
| 3.10 ALV-J与REV协同通路分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-72页 |
| 7 附录 | 第72-88页 |
| 8 致谢 | 第88-89页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第89页 |
