| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| 1.1 蛋白质定向进化的研究进展 | 第8-11页 |
| 1.1.1 蛋白质定向进化策略 | 第8-9页 |
| 1.1.2 蛋白质定向进化在代谢工程中的应用 | 第9-11页 |
| 1.2 腺苷琥珀酸合成酶的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 腺苷琥珀酸合成酶的生物功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 腺苷琥珀酸合成酶的改造在代谢工程中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 产肌苷枯草芽孢杆菌的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.3.1 肌苷的理化性质、功能和用途 | 第13-14页 |
| 1.3.2 肌苷的生物合成途径和代谢调节机制 | 第14-17页 |
| 1.3.3 肌苷的工业化生产 | 第17-18页 |
| 1.3.4 肌苷生产菌的代谢工程研究 | 第18-19页 |
| 1.4 选题背景与主要技术路线 | 第19-22页 |
| 1.4.1 选题背景 | 第19-21页 |
| 1.4.2 主要技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 引物设计与基因测序 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器及软件 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要药品及试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.5 主要溶液与培养基 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.2.1 目标PCR产物的扩增 | 第28-31页 |
| 2.2.2 目标DNA片段的回收与纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.4 质粒的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态制备 | 第34页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒的提取 | 第34-36页 |
| 2.2.7 全质粒扩增法构建突变文库 | 第36-37页 |
| 2.2.8 枯草芽孢杆菌Spizizen转化法 | 第37-38页 |
| 2.2.9 枯草芽孢杆菌木糖诱导的comK表达转化法 | 第38页 |
| 2.2.10 枯草芽孢杆菌无痕等位基因置换方法 | 第38-40页 |
| 2.2.11 枯草芽孢杆菌总DNA的提取 | 第40页 |
| 2.2.12 产核黄素枯草芽孢杆菌的发酵条件及生理参数测定 | 第40-42页 |
| 2.2.13 产肌苷枯草芽孢杆菌的发酵条件及生理参数测定 | 第42页 |
| 2.2.14 蛋白质二级结构的比对与三级结构预测 | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第43-66页 |
| 3.1 purA突变文库宿主菌的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.1 过表达comK基因 | 第43-44页 |
| 3.1.2 敲除purA基因 | 第44-45页 |
| 3.2 purA基因饱和突变点的选择 | 第45-47页 |
| 3.2.1 蛋白质二级结构比对确定Thr238潜在突变位点 | 第45-47页 |
| 3.2.2 Pro242突变位点的确定 | 第47页 |
| 3.3 点饱和突变文库的构建 | 第47-51页 |
| 3.3.1 模板质粒pSSN-purA的构建 | 第47-49页 |
| 3.3.2 全质粒扩增获得含点饱和突变文库的质粒 | 第49-51页 |
| 3.4 枯草芽孢杆菌感受态细胞形成条件的优化 | 第51-53页 |
| 3.5 优良性状突变菌株的筛选 | 第53-58页 |
| 3.5.1 平板初筛 | 第53-54页 |
| 3.5.2 摇瓶复筛 | 第54-56页 |
| 3.5.3 最优突变型的确定 | 第56-57页 |
| 3.5.4 突变型sAMP合成酶的酶活测定 | 第57-58页 |
| 3.6 肌苷生产菌株的构建 | 第58-61页 |
| 3.6.1 嘌呤代谢途径的解调 | 第58页 |
| 3.6.2 肌苷下游代谢基因pupG和deoD的敲除 | 第58-61页 |
| 3.7 purAP242N突变在肌苷合成中的应用 | 第61-66页 |
| 3.7.1 purA突变质粒的构建 | 第61-63页 |
| 3.7.2 purAP242N突变型等位基因置换 | 第63页 |
| 3.7.3 肌苷生产菌的生理参数 | 第63-66页 |
| 第四章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 4.1 结论 | 第66-67页 |
| 4.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
