| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-24页 |
| 1.1 核黄素 | 第8-9页 |
| 1.1.1 核黄素的理化性质 | 第8-9页 |
| 1.1.2 核黄素的功能和用途 | 第9页 |
| 1.2 B. subtilus核黄素合成途径及其代谢调控机制 | 第9-13页 |
| 1.2.1 核黄素合成基因及编码产物功能 | 第9-11页 |
| 1.2.2 核黄素的合成途径 | 第11-12页 |
| 1.2.3 Riboswitch | 第12-13页 |
| 1.3 B. subtilus嘌呤生物合成途径及其代谢调控机制 | 第13-15页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌嘌呤生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.2 嘌呤生物合成途径调控机制 | 第14-15页 |
| 1.4 B. subtilus电子传递链 | 第15-17页 |
| 1.4.1 细胞色素bd | 第16页 |
| 1.4.2 细胞色素aa3 | 第16-17页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌孢子形成过程 | 第17-18页 |
| 1.5.1 Spo0A和 σE作用 | 第17-18页 |
| 1.6 产核黄素B.subtilus工程菌构建策略 | 第18-22页 |
| 1.6.1 提高菌体对碳源的利用效率 | 第18-19页 |
| 1.6.2 增强核黄素生物合成途径相关基因的表达 | 第19-20页 |
| 1.6.3 增加核黄素生物合成途径前体物的供给 | 第20-21页 |
| 1.6.4 能量代谢途径的改造 | 第21-22页 |
| 1.7 选题背景和研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第27-28页 |
| 2.1.5 培养基 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌spizizen转化 | 第29-30页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| 2.2.4 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.5 PCR体系 | 第32-34页 |
| 2.2.6 DNA片段的纯化回收、酶切、去磷酸化和连接 | 第34-35页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第35-36页 |
| 2.2.8 酶切和连接体系 | 第36页 |
| 2.2.9 摇瓶发酵 | 第36-37页 |
| 2.2.10 菌体浓度的测定 | 第37页 |
| 2.2.11 葡萄糖和核黄素浓度的测定 | 第37页 |
| 2.2.12 菌种的保藏 | 第37-38页 |
| 2.2.13 目的基因的无痕操作 | 第38-40页 |
| 2.2.14 引物的设计和基因测序 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第41-64页 |
| 3.1 嘌呤途径的代谢工程改造 | 第41-48页 |
| 3.1.1 guaC基因的敲除 | 第41-43页 |
| 3.1.2 prs和ywl F基因的过表达 | 第43-45页 |
| 3.1.3 guaB基因的过表达 | 第45-48页 |
| 3.2 呼吸链和孢子形成过程的代谢工程改造 | 第48-52页 |
| 3.2.1 cyd基因的敲除 | 第49-50页 |
| 3.2.2 sigE基因的敲除 | 第50-52页 |
| 3.3 核黄素操纵子的过表达 | 第52-54页 |
| 3.3.1 amyE位点整合核黄素操纵子 | 第52-54页 |
| 3.3.2 游离型核黄素质粒pMX45的转化 | 第54页 |
| 3.3.3 核黄素操纵子的串联扩增 | 第54页 |
| 3.4 工程菌的发酵结果与分析 | 第54-64页 |
| 3.4.1 嘌呤途径代谢工程改造对菌株生理和核黄素合成的影响 | 第54-57页 |
| 3.4.2 呼吸链的代谢工程改造对菌株生理和核黄素合成的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.3 核黄素操纵子的过表达对菌株生理和核黄素合成的影响 | 第58-62页 |
| 3.4.4 孢子形成过程的代谢工程改造对核黄素合成的影响 | 第62-64页 |
| 第四章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 4.1 结论 | 第64-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
