| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 附录 | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 非酒精性脂肪肝 | 第13-15页 |
| 1.1.1 非酒精性脂肪肝概述 | 第13页 |
| 1.1.2 流行病学特征 | 第13页 |
| 1.1.3 发病机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 临床诊断和治疗 | 第14-15页 |
| 1.2 脂质代谢 | 第15-19页 |
| 1.2.1 脂肪酸的转运、合成代谢 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂肪酸的分解代谢 | 第16-17页 |
| 1.2.3 肝细胞中调控脂肪代谢的关键转录因子 | 第17页 |
| 1.2.4 肝细胞中调控脂肪代谢的关键蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.5 蛋白质组学技术在NAFLD疾病中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 钙调蛋白的作用及其信号转导途径研究 | 第19-22页 |
| 1.3.1 钙调蛋白结构和分布 | 第19-20页 |
| 1.3.2 钙调蛋白的功能 | 第20页 |
| 1.3.3 钙调蛋白参与的信号通路 | 第20-22页 |
| 1.4 降脂药物吉非罗齐 | 第22-23页 |
| 1.5 研究目的和内容 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-32页 |
| 2.1.1 实验细胞、质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24-27页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第27-29页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第29-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-43页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.2 蛋白质二维电泳 | 第33-36页 |
| 2.2.3 脂质提取、测定 | 第36-37页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR | 第37-39页 |
| 2.2.5 蛋白质免疫印迹(Western Blotting) | 第39-40页 |
| 2.2.6 细胞免疫荧光 | 第40-41页 |
| 2.2.7 钙离子的染色及测定 | 第41页 |
| 2.2.8 细胞转染 | 第41-42页 |
| 2.2.9 CALR重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.10 统计学方法分析 | 第43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-62页 |
| 3.1 NAFLD体外细胞模型的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.1 OA对SMMC-7721细胞系的增殖影响 | 第43页 |
| 3.1.2 NAFLD体外细胞模型中脂质积累的评估及测定 | 第43-45页 |
| 3.2 蛋白质二维电泳检测模型中差异表达的蛋白质 | 第45-49页 |
| 3.2.1 二维电泳技术获得2D图谱 | 第45-46页 |
| 3.2.2 质谱检测差异蛋白点及其功能确定、分类 | 第46-49页 |
| 3.3 差异蛋白CALR转录水平和蛋白水平的验证 | 第49页 |
| 3.4 CALR在细胞内的表达和定位 | 第49-50页 |
| 3.5 CALR对于细胞内钙离子的影响 | 第50-51页 |
| 3.5.1 Vonkossa法定位细胞内钙离子 | 第50-51页 |
| 3.5.2 流式细胞术测定细胞内钙离子浓度变化 | 第51页 |
| 3.6 CALR基因敲减模型构建及作用机制研究 | 第51-53页 |
| 3.6.1 CALR基因敲减模型构建及验证 | 第51-52页 |
| 3.6.2 CALR基因敲减对脂代谢相关基因的mRNA和蛋白表达改变情况 | 第52-53页 |
| 3.7 重组质粒pcDNA~(TM)3.1(+)-CALR的构建 | 第53-54页 |
| 3.7.1 CALR基因克隆 | 第53-54页 |
| 3.7.2 pcDNA~(TM)3.1(+)-CALR的构建、筛选和鉴定 | 第54页 |
| 3.8 CALR基因过表达模型构建及作用机制研究 | 第54-56页 |
| 3.8.1 CALR基因过表达模型构建及验证 | 第54-55页 |
| 3.8.2 CALR基因过表达对脂代谢相关基因和蛋白的表达改变情况 | 第55-56页 |
| 3.9 外源OA对于CALR基因敲减模型的调节作用 | 第56-58页 |
| 3.9.1 外源OA对于CALR基因敲减模型中脂质积累的影响 | 第56-57页 |
| 3.9.2 外源OA对于CALR基因敲减模型中相关脂代谢基因的表达改变情况 | 第57-58页 |
| 3.10 降脂药物吉非罗齐细胞模型的构建 | 第58-62页 |
| 3.10.1 吉非罗齐对SMMC-7721细胞系的增殖影响 | 第58页 |
| 3.10.2 吉非罗齐对模型中总脂、甘油三酯的影响 | 第58-59页 |
| 3.10.3 吉非罗齐对于CALR转录水平和蛋白水平的调节作用 | 第59-60页 |
| 3.10.4 吉非罗齐对脂代谢关键基因mRNA和蛋白水平表达量的改变 | 第60-61页 |
| 3.10.5 吉非罗齐对于脂代谢途径下游信号分子的影响 | 第61-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-66页 |
| 第五章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 论文清单 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
