摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
文献综述 | 第13-24页 |
第一章 肠道益生菌抗病毒作用及其机制研究进展 | 第13-24页 |
1.1 益生菌与肠道微生态系统 | 第13-15页 |
1.1.1 益生菌的概念和作用 | 第13页 |
1.1.2 益生菌所具有的特性 | 第13-14页 |
1.1.3 益生菌对肠道微生态系统的影响 | 第14-15页 |
1.2 肠道益生菌抗病毒作用研究现状 | 第15-16页 |
1.3 肠道益生菌抗病毒作用机制研究进展 | 第16-17页 |
1.4 肠道益生菌抗病毒作用研究模型 | 第17页 |
1.4.1 肠道益生菌功能研究的体外细胞模型 | 第17页 |
1.4.2 肠道益生菌抗病毒作用的体内研究模型 | 第17页 |
1.5 益生菌对免疫功能的影响 | 第17-20页 |
1.5.1 对肠内细胞信号通路的作用 | 第17-18页 |
1.5.2 对体液免疫的作用 | 第18页 |
1.5.3 对细胞因子释放的影响 | 第18-19页 |
1.5.4 对先d免疫的作用 | 第19页 |
1.5.5 对变态反应的作用 | 第19页 |
1.5.6 作为免疫调节的载体 | 第19-20页 |
1.6 肠道微生态研究方法与进展 | 第20-24页 |
1.6.1 宏基因组概念及研究策略 | 第20-21页 |
1.6.2 常用宏基因组学研究方法 | 第21-24页 |
试验研究 | 第24-114页 |
第二章 具有抗病毒作用的猪肠道益生菌的筛选 | 第24-38页 |
2.1 材料 | 第24-26页 |
2.1.1 样品及毒株 | 第24-25页 |
2.1.2 细胞 | 第25页 |
2.1.3 主要仪器和试剂 | 第25-26页 |
2.2 方法 | 第26-30页 |
2.2.1 猪肠道益生性乳酸菌的筛选 | 第26-27页 |
2.2.2 抗TGEV乳酸菌的筛选 | 第27-29页 |
2.2.3 筛选菌的 16S rDNA鉴定 | 第29-30页 |
2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
2.3.1 菌株分离及鉴定 | 第30页 |
2.3.2 乳酸菌的生化鉴定 | 第30-31页 |
2.3.3 乳酸菌对猪小肠上皮细胞的黏附性能 | 第31-32页 |
2.3.4 乳酸菌耐酸耐胆盐试验 | 第32页 |
2.3.5 抗TGEV益生菌菌株的筛选 | 第32-35页 |
2.3.6 乳酸菌 16S rDNA测序结果 | 第35-36页 |
2.4 讨论 | 第36-37页 |
2.4.1 猪肠道乳酸菌黏附性和抗逆性筛选 | 第36页 |
2.4.2 益生菌的抗TGEV作用初步检测 | 第36-37页 |
2.5 小结 | 第37-38页 |
第三章 益生菌体外抗病毒作用及免疫调节作用 | 第38-48页 |
3.1 材料与方法 | 第38-41页 |
3.1.1 材料 | 第38-39页 |
3.1.1.1 益生菌,毒株和细胞 | 第38页 |
3.1.1.2 主要试剂和仪器 | 第38-39页 |
3.1.2 方法 | 第39-41页 |
3.1.2.1 TGEV感染ST细胞模型的建立 | 第39页 |
3.1.2.2 TGEV在ST细胞上生长曲线的测定 | 第39-41页 |
3.2 结果 | 第41-45页 |
3.2.1 TGEV感染ST细胞的生长曲线 | 第41页 |
3.2.2 益生菌生长曲线的测定 | 第41-42页 |
3.2.3 益生菌及其代谢产物的细胞毒性结果 | 第42页 |
3.2.4 益生菌及其代谢产物不同接入顺序对TGEV抑制率的比较 | 第42-43页 |
3.2.5 益生菌及其代谢产物对TGEV感染抑制作用的半定量RT-PCR检测结果 | 第43页 |
3.2.6 益生菌对TGEV感染ST细胞的免疫调节作用 | 第43-45页 |
3.4 讨论 | 第45-47页 |
3.4.1 CCK-8 法间接比较益生菌及其代谢产物不同接入顺序对TGEV的抑制率 | 第45-46页 |
3.4.2 益生菌及其代谢产物对TGEV感染抑制作用的半定量RT-PCR检测 | 第46页 |
3.4.3 益生菌及其代谢产物对TGEV感染ST细胞的免疫调节作用 | 第46-47页 |
3.5 小结 | 第47-48页 |
第四章 猪流行性腹泻病毒的分离鉴定和动物回归分析 | 第48-65页 |
4.1 材料与方法 | 第48-53页 |
4.1.1 材料 | 第48-49页 |
4.1.2 方法 | 第49-53页 |
4.2 结果 | 第53-62页 |
4.2.1 病料的PEDV RT-PCR检测结果 | 第53页 |
4.2.2 PEDV M和S部分基因扩增 | 第53-54页 |
4.2.3 质粒鉴定及测序 | 第54-55页 |
4.2.4 M基因的序列分析 | 第55-58页 |
4.2.5 S基因测序结果分析 | 第58-60页 |
4.2.6 PEDV-WN株动物回归试验 | 第60-62页 |
4.3 讨论 | 第62-64页 |
4.4 小结 | 第64-65页 |
第五章 益生菌对感染PEDV-WN仔猪的保护作用和免疫调节作用 | 第65-82页 |
5.1 材料与方法 | 第65-67页 |
5.1.1 病毒和益生菌菌株 | 第65页 |
5.1.2 试验动物和饲养 | 第65-66页 |
5.1.3 动物分组和接种 | 第66页 |
5.1.4 样品收集 | 第66页 |
5.1.5 组织病理学分析 | 第66页 |
5.1.6 半定量PCR法检测病毒的排出 | 第66页 |
5.1.7 用ELISA检测血清中细胞因子的浓度 | 第66-67页 |
5.1.8 数据统计分析 | 第67页 |
5.2 结果与分析 | 第67-80页 |
5.2.1 口服益生菌对仔猪感染PEDV-WN病程和死亡率的影响 | 第67-68页 |
5.2.2 组织病理学变化分析 | 第68-71页 |
5.2.3 益生菌干预对PEDV-WN株毒力的影响 | 第71-72页 |
5.2.4 益生菌干预对PEDV-WN感染仔猪的免疫调节作用 | 第72-80页 |
5.3 讨论 | 第80-81页 |
5.3.1.益生菌可提高感染PEDV-WN株仔猪的生长性能 | 第80页 |
5.3.2.益生菌可减轻PEDV感染对仔猪小肠组织造成的病理损伤 | 第80页 |
5.3.3.益生菌干预可减少PEDV-WN在靶器官中的增殖 | 第80-81页 |
5.3.4.益生菌干预对PEDV-WN感染仔猪的免疫调节作用 | 第81页 |
5.4 小结 | 第81-82页 |
第六章 PEDV-WN株感染对仔猪肠道微生态平衡的影响 | 第82-114页 |
6.1 材料与方法 | 第82-85页 |
6.1.1 病毒、益生菌及试验动物 | 第82-83页 |
6.1.2 粪便菌群总DNA的提取 | 第83页 |
6.1.3 样品标记和分组 | 第83-84页 |
6.1.4 试验流程 | 第84页 |
6.1.5 高可变区引物设计和PCR扩增 | 第84页 |
6.1.6 Illumina测序文库构建(加入接头) | 第84页 |
6.1.7 信息分析流程 | 第84-85页 |
6.2 结果与分析 | 第85-111页 |
6.2.1 样品测序后clean数据 | 第85-86页 |
6.2.2 clean数据质量评估 | 第86-87页 |
6.2.3 OTU聚类统计 | 第87-88页 |
6.2.4 Alpha多样性分析 | 第88-92页 |
6.2.5 Beta多样性分析 | 第92-93页 |
6.2.6 样品PCoA分析 | 第93-96页 |
6.2.7 物种注释,分类及群落结构分析 | 第96-103页 |
6.2.8 物种系统发育进化树 | 第103-104页 |
6.2.9 Mestatasts分析 | 第104-111页 |
6.3 讨论 | 第111-113页 |
6.3.1. PEDV感染后仔猪肠道微生物的组成情况 | 第111-113页 |
6.3.2. 益生菌干预对肠道微生态组成的影响 | 第113页 |
6.4 小结 | 第113-114页 |
结论 | 第114-115页 |
本研究的创新点 | 第115-116页 |
参考文献 | 第116-126页 |
主要缩略词和中英文对照表(ABBREVIATION INDEX) | 第126-127页 |
致谢 | 第127-128页 |
作者简介 | 第128页 |