| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-31页 |
| ·蜘蛛及其内生菌研究概况 | 第10-16页 |
| ·青霉素酰化酶研究概况 | 第16-22页 |
| ·酶法半合成 β-内酰胺类抗生素 | 第17-19页 |
| ·青霉素G酰化酶表达调控及产业化 | 第19-20页 |
| ·PGA及 β-内酰胺抗生素的生物转化 | 第20页 |
| ·青霉素酰化酶的催化机理 | 第20-22页 |
| ·青霉素酰化酶酶活检测方法 | 第22页 |
| ·宏基因组学技术简介 | 第22-27页 |
| ·宏基因组学技术流程 | 第23-26页 |
| ·目标细菌及目标基因组富集 | 第23-24页 |
| ·宏基因组DNA提取 | 第24页 |
| ·宏基因组文库构建 | 第24-25页 |
| ·宏基因组文库筛选 | 第25-26页 |
| ·宏基因组学技术的具体应用 | 第26-27页 |
| ·微生物多样性研究 | 第26页 |
| ·在新资源开发利用中的应用 | 第26-27页 |
| ·在医学、诊断学中的应用 | 第27页 |
| ·全基因组扩增技术简介（whole genome amplification，WGA） | 第27-29页 |
| ·基于PCR的方法 | 第27页 |
| ·等温全基因组扩增 | 第27-28页 |
| ·多次退火环状循环扩增技术 | 第28-29页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第29-30页 |
| ·研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 成都平原蜘蛛内生菌菌群分子分类学调查研究 | 第31-61页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-37页 |
| ·蜘蛛代表种样本 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·菌株与载体 | 第32页 |
| ·工具酶、试剂盒和其它试剂 | 第32-33页 |
| ·常用溶液配制 | 第33-36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-45页 |
| ·蜘蛛样本采集及饥饿处理 | 第37页 |
| ·新鲜蜘蛛样本体表消毒 | 第37页 |
| ·蜘蛛及其内生菌基因组DNA提取方法 | 第37-38页 |
| ·蜘蛛内生菌多样性T-RFLP筛查及多样性分析 | 第38页 |
| ·成都平原蜘蛛内生菌高通量测序 | 第38-39页 |
| ·系统发育树构建 | 第39页 |
| ·酶学资源初步调查 | 第39页 |
| ·蜘蛛内生菌宏基因组 16S rDNA扩增 | 第39-40页 |
| ·TOP10菌株感受态细胞制备 | 第40-41页 |
| ·16S rDNA文库构建 | 第41-42页 |
| ·16S PCR扩增产物胶回收 | 第41页 |
| ·TA克隆、转化 | 第41页 |
| ·转化子质粒快检 | 第41-42页 |
| ·16S文库24孔深孔板扩大培养及质粒大量抽提 | 第42页 |
| ·pUC_m-T-16S rDNA限制性片段长度多态性（RFLP）分析方法探索 | 第42-43页 |
| ·单酶切反应 | 第42-43页 |
| ·配制 5%尿素变性聚丙烯酰胺凝胶。 | 第43页 |
| ·预电泳及电泳分离单链DNA片段 | 第43页 |
| ·16S rDNA克隆文库RFLP分析及银染色方法 | 第43-45页 |
| ·全文库单酶切 | 第43-44页 |
| ·全文库尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 | 第44页 |
| ·全文库银染色 | 第44页 |
| ·染色结果的聚类分析 | 第44-45页 |
| ·棒络新妇蛛的两种酶切结果对比及最小菌群组成 | 第45页 |
| ·实验结果和分析 | 第45-60页 |
| ·蜘蛛样本情况 | 第45-46页 |
| ·蜘蛛及其内生菌提取效果 | 第46页 |
| ·T-RFLP分析结果 | 第46-48页 |
| ·T-RFLP筛查 | 第46页 |
| ·MiCA分析 | 第46-48页 |
| ·高通量测序分析报告 | 第48-51页 |
| ·序列归属及分布 | 第48-51页 |
| ·测序文库的基本信息 | 第51页 |
| ·构建内生菌系统发育树 | 第51-53页 |
| ·酶学资源初步调查 | 第53-55页 |
| ·感受态细胞制备 | 第55页 |
| ·16S克隆文库构建 | 第55-56页 |
| ·文库RFLP分析 | 第56-58页 |
| ·棒络新妇样本酶切对比及最小菌群组成 | 第58-60页 |
| ·实验结果及讨论 | 第60-61页 |
| 第三章 成都平原蜘蛛内生菌宏基因组文库构建及青霉素酰化酶初步筛选 | 第61-75页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·蜘蛛样本 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·菌株与载体 | 第61-62页 |
| ·工具酶、试剂盒和其它试剂 | 第62页 |
| ·常用溶液配制 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-67页 |
| ·蜘蛛内生菌的BLAST分类学调查及简并引物设计 | 第62页 |
| ·蜘蛛样本预处理 | 第62-63页 |
| ·宏基因组DNA提取及全基因组扩增 | 第63页 |
| ·限制性内切酶的选择及最优酶切时间确定 | 第63-64页 |
| ·建立酶切体系 | 第64页 |
| ·部分酶切时间优化 | 第64页 |
| ·回收部分酶切产物 | 第64页 |
| ·宏基因组文库构建 | 第64-66页 |
| ·宏基因组文库初步筛选及阳性克隆序列分析 | 第66页 |
| ·矩阵文库的保存 | 第66-67页 |
| ·实验结果及分析 | 第67-72页 |
| ·简并引物设计 | 第67-68页 |
| ·宏基因组提取，全基因组扩增 | 第68页 |
| ·限制性内切酶的选择及最优酶切时间确定 | 第68-69页 |
| ·板混合池筛选阳性克隆子 | 第69-71页 |
| ·阳性克隆序列分析 | 第71-72页 |
| ·BLASTp检索 | 第71页 |
| ·系统发育分析 | 第71-72页 |
| ·基序分析 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·宏基因组技术是研究内生菌的有力武器 | 第72页 |
| ·PCR筛选方法的灵敏性和有效性 | 第72-73页 |
| ·序列分析结果 | 第73页 |
| ·部分酶切建库分析 | 第73-75页 |
| 第四章 热不对称交错PCR（TAIL-PCR）克隆青霉素酰化酶研究 | 第75-84页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·菌株与载体 | 第76页 |
| ·工具酶、试剂盒和其它试剂 | 第76页 |
| ·常用溶液配制 | 第76-77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-80页 |
| ·文库的复苏 | 第77页 |
| ·上游巡查引物及随机简并引物设计 | 第77-78页 |
| ·文库混合质粒的提取 | 第78页 |
| ·第一轮TAIL-PCR反应体系 | 第78-79页 |
| ·第二轮TAIL-PCR反应体系 | 第79-80页 |
| ·扩增产物电泳检测 | 第80页 |
| ·第二轮TAIL-PCR产物纯化、测序 | 第80页 |
| ·实验结果及分析 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第93-94页 |
| 综述 | 第94-105页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 附录 | 第105-106页 |
