| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一部分 蜡样芽孢杆菌胶原酶的纯化及酶学性质 | 第11-35页 |
| 第一章 前言 | 第11-16页 |
| ·课题的研究背景 | 第11-14页 |
| ·胶原蛋白 | 第11-12页 |
| ·胶原酶的研究现状 | 第12页 |
| ·微生物胶原酶的应用 | 第12-13页 |
| ·微生物胶原酶的优势 | 第13页 |
| ·胶原酶的分离纯化 | 第13页 |
| ·产酶条件优化 | 第13-14页 |
| ·课题的研究依据及意义 | 第14页 |
| ·课题的研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-22页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·菌种 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第16-18页 |
| ·实验仪器设备 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·菌种的活化 | 第18页 |
| ·粗酶液的制备 | 第18页 |
| ·胶原酶活力的测定 | 第18-19页 |
| ·发酵条件的优化 | 第19页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第19-20页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第20页 |
| ·聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE电泳）及胶原酶谱法 | 第20页 |
| ·AKTA Purifier 10 蛋白纯化 | 第20-22页 |
| 第三章 结果与分析 | 第22-31页 |
| ·菌种复苏 | 第22页 |
| ·发酵条件的优化 | 第22-25页 |
| ·发酵温度对胶原酶活力的影响 | 第22-23页 |
| ·发酵时间对胶原酶活力的影响 | 第23页 |
| ·发酵接种量 | 第23-24页 |
| ·发酵条件正交试验 | 第24-25页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第25-27页 |
| ·碳源对胶原酶活力的影响 | 第25页 |
| ·氮源对酶活力的影响 | 第25页 |
| ·起始pH值对酶活力的影响 | 第25-26页 |
| ·发酵培养基的正交试验 | 第26-27页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第27-28页 |
| ·AKTA Purifier 10 蛋白纯化 | 第28-30页 |
| ·Butyl FF疏水层析 | 第28-29页 |
| ·Superdex TM 200 凝胶过滤层析 | 第29-30页 |
| ·蛋白纯化过程中酶的比活力测定 | 第30-31页 |
| 第四章 讨论 | 第31-33页 |
| 第五章 总结与展望 | 第33-35页 |
| ·研究结论 | 第33页 |
| ·研究的创新点 | 第33-34页 |
| ·研究展望 | 第34-35页 |
| 第二部分 蜡样芽孢杆菌胶原酶在毕赤酵母中的表达 | 第35-59页 |
| 第一章 前言 | 第35-39页 |
| ·课题的研究背景 | 第35-37页 |
| ·胶原酶的纯化和表达 | 第35页 |
| ·毕赤酵母的特性 | 第35-36页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第36页 |
| ·真核表达载体 | 第36-37页 |
| ·课题的研究依据及意义 | 第37页 |
| ·课题的研究内容 | 第37-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-49页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌种与质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·试剂及耗材 | 第40页 |
| ·实验仪器设备 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-49页 |
| ·蜡样芽孢杆菌基因组提取 | 第41-42页 |
| ·胶原酶基因引物设计 | 第42页 |
| ·胶原酶基因的扩增及产物检测 | 第42-43页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·重组载体的电转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第46页 |
| ·胶原酶基因在酵母中的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·鱼鳞胶原蛋白的提取 | 第47-48页 |
| ·重组胶原酶对胶原蛋白的降解作用 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-56页 |
| ·胶原酶基因扩增及鉴定引物 | 第49页 |
| ·胶原酶基因的扩增 | 第49-50页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·质粒的转化 | 第50页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·质粒的测序 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第52页 |
| ·胶原酶的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·鱼鳞胶原蛋白的提取 | 第53-54页 |
| ·重组胶原酶对胶原蛋白的降解作用 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 总结与展望 | 第58-59页 |
| ·研究结论 | 第58页 |
| ·研究创新点 | 第58页 |
| ·研究展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 发表论文、参加科研情况说明 | 第63-65页 |
| （一）参与发表的论文 | 第63页 |
| （二）参与的专利 | 第63-64页 |
| （三）参加科研情况说明 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |